Diagnostické erytrocytové salmonely vi antigénne. Analytický a diagnostický výkon
Cena: na požiadanie
Produkt môžete pridať do košíka zadaním množstva
Sada reagencií Diagnosticum Salmonella VI-antigénna je určená na detekciu špecifických protilátok proti Vi-antigénu Salmonella typhus v ľudskom krvnom sére pri pasívnej hemaglutinačnej reakcii (RPHA).
SADA CHARAKTERISTIKY
2.1. Princíp metódy.
Účinnou látkou antigénneho antigénu Diagnosticum Salmonella VI je Vi-antigén fixovaný na povrchu erytrocytov. Pri interakcii so sérami obsahujúcimi protilátky proti B-antigénu sa pozoruje jav aglutinácie erytrocytov.
2.2. ZLOŽENIE SADY
Činidlá | číslo |
Vi-antigénna kvapalina Diagnosticum erythrocyte salmonella - je 1% suspenzia baraních erytrocytov formalizovaných a senzibilizovaných Vi-antigénom Salmonella typhus vo fosfátovom tlmivom roztoku (pH 7,2 + 0,2; koncentrácia 0,06 mol / l). Homogénna hnedá suspenzia bez vločiek; po usadení sa vytvoria 2 vrstvy: hustá hnedá zrazenina erytrocytov a priehľadný žltkastý supernatant | 1 fľaša - 3 ml |
Diagnostické sérum salmonely adsorbované na V receptore suché -homogénna hmota od bielej s hnedastým odtieňom po béžovú | 1 fľaša - od 0,1 ml |
1% suspenzia formalizovaných, nesenzibilizovaných ovčích erytrocytov - homogénna hnedá suspenzia bez vločiek; po usadení sa vytvoria 2 vrstvy: hustá hnedá zrazenina erytrocytov a priehľadný žltkastý supernatant | 1 fľaša - |
Roztok na riedenie séra a produkciu RPHA -0,9% roztok chloridu sodného je číra bezfarebná kvapalina, pH 6,5 až 7,5 | 2 fľaše - každá po 8 ml |
Jednorazová doštička s guľatým dnom pre imunologické reakcie -pozostáva z 8 radov, z ktorých každý obsahuje 12 otvorov s priehľadným, bezfarebným, okrúhlym dnom | 1 ks |
ANALYTICKÉ A DIAGNOSTICKÉ CHARAKTERISTIKY.
3.1. Diagnosticum by sa malo aglutinovať v RPHA diagnostickým sérom Salmonella adsorbovaným na B a B receptore v suchu v zriedení najmenej 1: 160.
Podmienená úroveň diagnostických charakteristík krvného séra zdravých ľudí by sa mala považovať za zriedenie séra nie väčšie ako 1:20.
3.2. Čas analýzy je 2 hodiny.
3.3. Sada je určená pre 8 definícií.
BEZPEČNOSTNÉ OPATRENIA
Pri práci so súpravou je potrebné dodržiavať „Pravidlá pre zariadenie, bezpečnostné opatrenia, priemyselné hygienické zariadenia, protiepidemický režim a osobnú hygienu pri práci v laboratóriách (oddeleniach, oddeleniach) sanitárnych a epidemiologických inštitúcií ministerstva zdravotníctva ZSSR (Moskva, 1981).
Analyzované séra, ako aj činidlá, ktoré s nimi prichádzajú do styku, by sa mali považovať za potenciálne infekčné, schopné dlhodobo udržiavať alebo prenášať HIV, vírus hepatitídy alebo akékoľvek iné pôvodcu vírusovej infekcie - malo by sa s nimi manipulovať opatrne:
- práca s gumovými rukavicami;
- pri pipetovaní musíte používať automatické pipety;
- po ukončení práce by mali byť analyzované séra a činidlá v kontakte s nimi, nástroje ošetrené dezinfekčným roztokom
- pred a po práci utrite zariadenie 70% etylalkoholom.
Analyzované séra by sa mali inaktivovať pri teplote 56 ° C po dobu 30 minút.
Diagnostické sérum Salmonella adsorbované na B a B receptor zahrnuté v súprave je inaktivované.
Objektívne výsledky skúšky sú zaručené za nasledujúcich podmienok:
- skladujte všetky reagencie zo súpravy pri teplote od 2 do 8 0 ° C;
- nepoužívajte exspirované činidlá;
- nepoužívajte reagencie súpravy, ak ich obal nie je zodpovedajúcim spôsobom označený;
- pre činidlá RPHA používajte iba v tejto súprave.
Osvedčenie o registrácii č. RZN 2016/3905 zo dňa 04.04.2016
Vymenovanie
Sada reagencií „Diagnosticum erythrocyte salmonella Vi-antigenic for RPHA“ (SED-Vi) je určená na detekciu protilátok proti Vi-antigénu pôvodcu týfusu v ľudskom krvnom sére pasívnou hemaglutinačnou reakciou (RPHA).
Nastavená charakteristika
Princíp činnosti
V prítomnosti protilátok proti pôvodcovi brušného týfusu sa pozoruje hemaglutinácia kuracích erytrocytov senzibilizovaných na vi-antigén, čo vedie k vytvoreniu „dáždnika“ usadených erytrocytov na dne jamiek tablety v tvare písmena U. Pri absencii protilátok proti pôvodcovi brušného týfusu tvoria usadené erytrocyty „bod“.
Nastaviť zloženie
Názov činidla | Popis | Množstvo v sade |
---|---|---|
Diagnosticum erythrocyte salmonella Vi-antigénny, suchý 6% (EDC) | Formalizované kuracie erytrocyty senzibilizované Vi-antigénom S. typhi. Suchá hygroskopická hmota hnedej farby. Po rozpustení je suspenzia červenohnedá. | 1 fľaša, 0,6 ml |
Diagnostická séra salmonely adsorbovaná, Vi receptor, suchý (riedenie 1:20, (K +)) | Králičie sérové \u200b\u200bsalmonely adsorbované, Vi receptor, zriedenie 1:20. Suchá hygroskopická biela pórovitá hmota. Po rozpustení - číra nažltlá kvapalina alebo bezfarebná. | 1 fľaša, 0,3 ml |
Riedidlo vzorky (RIP) | Číra modrofialová tekutina. | 1 fľaša, 10 ml |
Fosfátom pufrovaný soľný roztok (PBS) | Priehľadná bezfarebná kvapalina. | 1 fľaša, 10 ml |
Polymérna platňa na jedno použitie pre imunologické reakcie | Polymérna platňa na jedno použitie na imunologické reakcie vyrobená z priehľadného bezfarebného polystyrénu. | 1 ks. |
Diagnostické vlastnosti
Diagnosticum sa má aglutinovať v RPHA diagnostickým sérom adsorbovaným na salmonely, Vi receptorom, suchým (pri zriedení 1:20), na titer uvedený na štítku séra. Podmienená úroveň diagnostických charakteristík krvného séra zdravých ľudí by sa mala považovať za zriedenie séra nie väčšie ako 1:20. Čas analýzy je 3040 minút. Súprava je určená na štúdium 42 krvných sér v skríningovej verzii alebo 10 krvných sér v titračnej verzii.
Preventívne opatrenia
Súprava je určená iba na diagnostické použitie in vitro. Látky obsiahnuté v súprave sú inaktivované a bezpečné. Pri práci so súpravou je potrebné dodržiavať SP 1.3.2322-08 a SanPiN 2.1.7.2790-10.
Dodatočné vybavenie a materiály
Vybavenie, materiály, riešenia:
- jednokanálové pipetovacie dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5 - 40 μl; 40 - 200 μl; 200 - 1 000 μl a 1 000 - 5 000 μl;
- pipetovacie dávkovače 8- alebo 12-kanálové s premenlivým dávkovacím objemom 5 - 40 μl a 40 - 200 μl;
- destilovaná voda (GOST 6709-72).
Analyzované vzorky
Skúmané vzorky krvného séra sa uchovávajú pri teplote 2 až 8 ° C najviac 3 dni od okamihu odberu krvi. Sérum je povolené skladovať v zmrazenom stave pri teplote nepresahujúcej mínus 18 ° С najviac 1 rok. Pred použitím sa vzorky nechajú roztopiť pri teplote 16 až 25 ° C a trepaním sa zmiešajú. Zmrazovanie nie je povolené. Nemali by sa používať vzorky s množením baktérií a hemolýzou. Pred nastavením reakcie sa testované séra 30 minút zahrievajú na 56 ° C.
Analýza
Príprava kontrolného diagnostického séra (K +)
Pripravte pracovný roztok diagnostického séra adsorbovaného na salmonely, Vi receptora, suchého (zriedenie 1:20) z 0,3 ml (K +). Za týmto účelom sa do obsahu fľaštičky s K + pridá 0,3 ml fyziologického roztoku pufrovaného fosfátmi (PBS). Zvyšné množstvo séra je možné rozdeliť na alikvóty a skladovať ich zmrazené pri teplote nepresahujúcej mínus 18 ° C najviac 6 mesiacov.
Príprava diagnostiky erytrocytovej salmonely (EDS)
Na prípravu pracovného zriedenia suspenzie erytrocytovej salmonely diagnostika sa k obsahu fľaštičky so suchým 6% EDMS pridá 0,6 ml destilovanej vody a nechá sa 2 hodiny hydratovať pri teplote 16 až 25 ° C. Potom sa k roztoku pridá 2,4 ml fyziologického roztoku pufrovaného fosfátmi (PBS). Pracovný roztok sa skladuje pri teplote 2 až 8 ° C najviac 1 mesiac. Zmrazovanie nie je povolené.
RPHA staging na skríning krvného séra
Krvné sérum pre skríningové štúdie sa riedi v jamkách doštičky nasledovne:
- predbežné riedenia 1:20 sa pripravia v prvých jamkách doštičky, najskôr sa pridá 190 μl roztoku RIP, potom 10 μl študovaného séra. Každé sérum sa pridá samostatným hrotom a opatrne sa pipetuje (farba roztoku v jamkách po pridaní séra by sa mala zmeniť z modrofialového na zelené);
- v druhej jamke sa pripravia skríningové riedenia 1:40, najskôr sa pridá 25 μl roztoku PBS a potom 25 μl predtým zriedeného séra a opatrne sa pipetuje.
Pri každom nastavení RPHA je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K +. Za týmto účelom sa do 8 otvorov dlhého radu pridá 50 μl roztoku PBS. Potom sa do prvej jamky pridá 50 μl pracovného roztoku K + (1:20), opatrne sa pipetuje a prenesie sa do ďalších jamiek, každá s obsahom 50 μl, pričom sa získajú dvojnásobné zriedenia od 1:40 do 1: 5120. V ďalších 4 jamkách sa pridá 50 ul roztoku PBS na kontrolu SED kvôli absencii spontánnej hemaglutinácie.
Do všetkých jamiek doštičky so skríningovými riedeniami študovaných sér (s výnimkou prvých, ktoré obsahujú RIP) a kontroly pridajte 25 μl EDM. Pred použitím premiešajte suspenziu SED v injekčnej liekovke alebo tácke! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa stáť 30 až 40 minút pri teplote 16 až 25 ° C, kým sa erytrocyty v kontrolnej vzorke úplne usadia.
Formulácia RPHA počas titrácie študovaných krvných sér
Titrácia študovaných sér a pracovného roztoku K + sa uskutočňuje v krátkych radoch doštičky. Ďalší krátky riadok sa používa na kontrolu absencie spontánnej hemaglutinácie EDMS.
Do prvých jamiek s krátkymi radmi na titráciu testovacieho séra sa pridá 180 μl roztoku RIP. Do všetkých ostatných jamiek sa pridá 50 μl roztoku PBS.
Do jamiek s roztokom RIP pridajte 20 μl skúmaného séra (získajte zriedenie 1:10). Každé sérum je pridané svojim vlastným špičkou a opatrne pipetované (farba roztoku v jamkách by sa mala meniť z modro-fialovej na zelenú). Potom sa z prvých jamiek prenesie 50 μl do ďalších jamiek v radoch, pričom sa dostanú dvojnásobné riedenia od 1:20 do 1: 1280. Na konci titrácie sa z posledných jamiek odstránia roztoky v objeme 50 μl.
Pri každom nastavení RPHA je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K +. Za týmto účelom sa do 8 otvorov dlhého radu pridá 50 μl roztoku PBS. Potom sa do prvej jamky pridá 50 μl pracovného roztoku K + (1:20), opatrne sa pipetuje a prenesie sa do ďalších jamiek, každá s obsahom 50 μl, pričom sa získajú dvojnásobné zriedenia od 1:40 do 1: 5120.
Na kontrolu diagnostiky absencie spontánnej hemaglutinácie sa do všetkých jamiek krátkeho radu pridá 50 μl roztoku PBS.
Do všetkých jamiek (s výnimkou prvých jamiek v každom rade pre študované séra obsahujúce RIP) pridajte 25 μl EDM. Pred použitím premiešajte suspenziu SED v injekčnej liekovke alebo tácke! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa stáť 30 až 40 minút pri teplote 16 až 25 ° C, kým sa erytrocyty v kontrolnej vzorke úplne usadia.
Účtovníctvo a interpretácia výsledkov
Zváženie výsledkov pri skríningu krvného séra
Výsledky sa zaznamenávajú podľa konvenčnej stupnice štyroch krížení. Za titer séra sa považuje jeho zriedenie, ktoré vedie k hemaglutinácii najmenej 3-krát (+++).
- ++++ (4+) - aglutinované erytrocyty tvoria na spodnej časti otvoru obrátený „dáždnik“, jeho okraje spadajú;
- +++ (3+) - aglutinované erytrocyty tvoria na spodnej časti otvoru obrátený „dáždnik“, jeho okraje sú rovnomerné;
- ++ (2+) - spolu s aglutinovanými erytrocytmi na dne jamky je usadenina vo forme malého „prstenca“ neaglutinovaných erytrocytov;
- + (1+) - väčšina erytrocytov nie je aglutinovaná a usadzuje sa vo forme malého „krúžku“;
- (-) - neaglutinované erytrocyty tvoria "bod" v spodnej časti otvoru.
Za pozitívny výsledok sa považuje hemaglutinácia erytrocytov naplnených Vi-antigénom najmenej 3 kríženiami (+++).
Kontrola kvality diagnostika je 4 jamky kontrolného radu, do ktorých bol pridaný iba roztok PBS a SED. V týchto jamkách by nemala byť spontánna hemaglutinácia - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala opakovať. Ak sa počas opakovaného nastavenia objaví hemaglutinácia, liek sa nepoužíva.
Séra s negatívnym výsledkom by sa mali považovať za bez protilátok proti Vi-antigénu pri diagnostickom titri 1:40 a menej.
Séra, ktoré dávajú pozitívny výsledok pri zriedení 1:40, by sa mali vo variante znovu testovať titráciou séra, aby sa stanovil jeho titer.
Zváženie výsledkov pri titrácii krvného séra
Titrom séra je jeho zriedenie, pri ktorom sa dosiahne hemaglutinácia nie menej ako 3 (+++).
Kontrola kvality diagnostika je jamka v rade pre kontrolu SED. V týchto jamkách by nemala byť spontánna hemaglutinácia - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala opakovať. Ak sa počas opakovaného nastavenia objaví hemaglutinácia, liek sa nepoužíva.
DIAGNOSTICUM (Grécky, diagnostikos schopný rozpoznať) - suspenzie neutralizovaných mikroorganizmov používané ako antigény pre sérologické reakcie. Nebezpečenstvo práce so živými kultúrami, ich schopnosť variability a prítomnosť širokých antigénnych spojení odporúčajú používať D. - štandardnejšie a homogénnejšie prípravky obsahujúce určité antigénne zložky.
Pomocou D. pri reakciách aglutinácie, pasívnej (nepriamej) hemaglutinácie (RPHA) atď. Sa v sérach ľudí a zvierat zisťujú špecifické protilátky s cieľom diagnostikovať a študovať imunitný stav tela.
D. sa obzvlášť často používa v laboratórnych štúdiách na intestinálne infekcie. Všeobecnosť antigénnej štruktúry črevných baktérií však určuje prítomnosť skrížených reakcií a vyžaduje diferencovanú detekciu protilátok. Za týmto účelom sa uskutočňuje selektívna supresia jednotlivých antigénov: pomocou fenolu alebo formalínu je potlačená O-aglutinovateľnosť, ako to naznačujú Felix a Olitsky (A. Felix, L. Olitzki, 1928). Ovplyvnením alkoholom podľa Wienovej a Sontagovej metódy alebo zahrievaním podľa Kauffmanna sa získajú O-diagnostika s inaktivovaným bičíkovým antigénom. Ešte sľubnejšie je použitie mono diagnostika, ktorej princíp vyvinul F. G. Berngoff (1944). Tieto lieky obsahujú iba jednu antigénnu zložku a interagujú iba s určitými špecifickými protilátkami.
Ukazuje sa možnosť zachovania vlastností bakteriálneho D. pomocou ich lyofilizácie (pozri).
D., ktoré sa používajú na sérodiagnostiku rôznych infekcií, sú si v zásade podobné, niektoré druhy týchto liekov však majú určitú špecifickosť.
Všeobecne sa uznáva, že RPHA je citlivejšia a špecifickejšia ako bakteriálna aglutinácia. Ako antigény v RPHA sa používajú formalizované erytrocyty senzibilizované antigénmi získanými metódami Boivin a Westphal.
Je tiež možné použiť erytrocyt D. na detekciu antigénu v tkanivách, vylučovanie pacientov, extrakty rôznych látok atď. V týchto prípadoch sa používajú erytrocyty senzibilizované protilátkami - „diagnostika protilátok“.
Vírus D. sa používa hlavne pri reakcii fixácie komplementu (RSK), RTGA a neutralizačnej reakcie. Sú pripravené z vakcinovaných kultivačných kvapalín spracovaných (inaktivovaných) rôznymi spôsobmi.
Stručný opis hlavného D. a rozsahu ich použitia sú uvedené v tabuľke.
Vo vedeckej práci sa používajú aj experimentálne lieky: erytrocyty colidiagnosticum, záškrt erytrocytu D., hemaglutinačné antigény vírusov príušníc, hemaglutinačný antigén osýpok atď.
Tabuľka. Stručný popis hlavných diagnostických nástrojov a účel ich použitia
Diagnosticums |
stručný popis |
Účel aplikácie (použije sa sérum subjektu) |
Bakteriálna diagnostika |
||
Diagnostika z baktérií črevnej rodiny: Shigella Flexner, Sonne, Newcastle; salmonella typhus (OH, O), paratyfidová horúčka A a B, cholera suis, typhimurium, entertidis |
Mikrobiálna suspenzia (3 miliardy mikrobiálnych teliesok v 1 ml), inaktivovaná 0,4-0,5% roztokom formalínu |
Vyhlásenie o aglutinačnej reakcii na objasnenie klinu, diagnóza ochorenia |
O-diagnostika salmonely (2, 4, 7, 8, 9 a 3, 10) |
Mikrobiálna suspenzia obsahujúca čiastočný O-antigén (3 miliardy mikrobiálnych telies v 1 ml), získaná z vybraných kmeňov, inaktivovaná 15% roztokom glycerínu |
Založenie aglutinačnej reakcie na detekciu O-protilátok pri salmonelóze |
Salmonella H-monodiagnosticums (a, b, c, d, eh, c, k, lv, gm, p, st a antigény druhej fázy - 1, 2, 5, 6, 7) |
Mikrobiálna suspenzia obsahujúca zložky bičíkového antigénu 1. a 2. fázy (3 miliardy mikrobiálnych teliesok v 1 ml), získaná z vybraných kmeňov, inaktivovaná 0,5% roztokom formalínu |
Zavedenie aglutinačnej reakcie na detekciu H-protilátok na diagnostické účely a na zistenie anamnézy ochorenia |
Vi-diagnostika |
Mikrobiálna suspenzia (3 miliardy mikrobiálnych telies v 1 ml) z kmeňov obsahujúcich Vi-faktor, ošetrená 0,4% roztokom formalínu a 0,6% roztokom chloridu vápenatého |
Nastavenie aglutinačnej reakcie na detekciu bakteriálnych nosičov týfusu |
Brucellosis single diagnosticum |
Suspenzia brucelly v 12% roztoku chloridu sodného, \u200b\u200bzafarbená na modrá farba a inaktivovaná 0,5% roztokom fenolu |
Aglutinačný test (Wrightov test a Huddlesonov test na identifikáciu infikovaných ľudí a zvierat - pozri brucelózu, výskumné metódy) |
Tularemia diagnostium |
Mikrobiálna suspenzia (25 miliárd mikrobiálnych telies v 1 ml) očkovacieho kmeňa, inaktivovaná 0,5% roztokom formalínu |
Vyhlásenie o objemovej kvapkovej aglutinačnej reakcii na skle pre sérodiagnostiku a štúdium imunitného stavu očkovaných |
Diagnostika leptospirózy |
Lyofilizovaná mikrobiálna suspenzia 11 kmeňov najbežnejších sérotypov |
Vyhlásenie RSK na potvrdenie klinu, diagnostika choroby |
Rickettsiálna diagnostika |
Korpuskulárne antigény - suspenzia rickettsie vypestovanej v žĺtkových vakoch kuracích embryí alebo pľúcnom rickettsiálnom materiáli z infikovaných hlodavcov, ošetrená éterom, celitom alebo diferenciálnou centrifugáciou |
Vyhlásenie o aglutinačnej reakcii na diferenciálnu diagnostiku rickettsióz |
Diagnostika erytrocytov od Shigella Flexner - Sonne |
Formalizované erytrocyty senzibilizované antigénmi Boivin, Westphal atď. |
Vyhlásenie o RPGA na objasnenie klinovej „diagnózy úplavice |
Erytrocytová salmonella Vi-diagnostika |
Formalizované erytrocyty senzibilizované purifikovaným Vi-antigénom |
Vyhlásenie o RPGA na detekciu prenosu bakteriálneho týfusu |
O-diagnostika erytrocytov salmonely (1, 2, 12; 1, 4, 12; 6, 7; 6, 8; 1, 9, 12; 3, 10 a komplexná) |
1% suspenzia formalizovaných erytrocytov senzibilizovaných na antigény Boivin, Westphal atď. |
Vyhlásenie o RPHA na objasnenie klinovej „diagnózy choroby |
Lyophilized tularemia erythrocyte diagnosticum |
Formalizované lyofilizované erytrocyty senzibilizované antigénom tularémie |
Vyhlásenie o RPHA na objasnenie klinu, diagnózy tularémie, ako aj reakcie neutralizácie protilátok na detekciu: antigénu |
Diagnostika vírusov |
||
Antigén vakcínového vírusu |
Suchá príprava živého vírusu vakcínie kultivovaného na chorion-alantoidnej membráne kuracích embryí |
Vyhlásenie o RPHA na detekciu antihemaglutinínov u pacientov a očkovaných |
Antigén špecifický pre adenovírus |
Pripravený kultiváciou vírusu typu 6 v transplantovateľnej bunkovej kultúre A-1 (antigén spoločný pre všetky adenovírusy) |
Stanovenie CSC na detekciu protilátok viažucich komplement v sére pacientov |
Diagnostika kliešťovej encefalitídy a chorôb z etiologického hľadiska podobných |
Vyhlásenie RSK a RTGA na objasnenie klinu, diagnostika choroby |
|
Ornithoidový antigén |
Suchý prípravok z varených vakcinovaných žĺtkových vakov kuracích embryí, extrahovaných éterom, vyzrážaných acetónom a inaktivovaných mertiolátom |
Formulácia RSK na diagnostiku ornitózy u ľudí, vtákov a zvierat |
Diagnostika chrípky suchá |
Alantoidná tekutina z vyvíjajúcich sa kuracích embryí infikovaných jedným z kmeňov vírusu chrípky typu A, B alebo C, inaktivovaná formalínom, mertiolátom. Kvôli variabilite antigénnej štruktúry vírusu chrípky je zabezpečená častá zmena produkčných kmeňov. |
Vyhlásenie RTGA na objasnenie klinu, diagnostika choroby |
Parainfluenza diagnostium typ 1, 2, 3 pre RTGA, suchý |
Kultivačná tekutina (ľudská embryonálna oblička) obsahujúca jeden z kmeňov vírusu parainfluenza, ošetrená tween-80, éterom a mertiolátom |
Vyhlásenie RTGA na objasnenie klinu, diagnostika choroby |
Bibliografia: Zuev AS Bakteriálna vi-diagnostika na detekciu chronických nosičov baktérií týfusu, Zhurn, micr., Epid a imun., Č. 2, s. 51, 1959, bibliogr .; Zuev AS, Novoselova AI a Likina IV Vývoj techniky na výrobu O-diagnostika a H-monodiagnostiky a ich aplikácia v sérodiagnostike salmonelózy, ibid., Č. 3, s. 42, 1956; Imunológia a prevencia črevné infekcie, vyd. S.I.Didenko, s. 180, M., 1962; Karalnik BV Erythrocytic diagnostics, M., 1976; Pokyny pre mikrobiologickú diagnostiku infekčných chorôb, vyd. K. I. Matveeva, s. 172, M., 1973; Subbotina Yu. L. a ďalší. Sérologická diagnostika salmonelózy a antigénnych spojení pri reakciách s erytrocytovými a bakteriálnymi O-diagnostikami, Zhurn, micr., Epid a imun., Č. 3, s. 19, 1970, bibliogr.
L.B. Epiphany.
Osvedčenie o registrácii č. RZN 2016/3905 zo dňa 04.04.2016
Vymenovanie
Sada reagencií „Diagnosticum erythrocyte salmonella Vi-antigenic for RPHA“ (SED-Vi) je určená na detekciu protilátok proti Vi-antigénu pôvodcu týfusu v ľudskom krvnom sére pasívnou hemaglutinačnou reakciou (RPHA).
Nastavená charakteristika
Princíp činnosti
V prítomnosti protilátok proti pôvodcovi brušného týfusu sa pozoruje hemaglutinácia kuracích erytrocytov senzibilizovaných na vi-antigén, čo vedie k vytvoreniu „dáždnika“ usadených erytrocytov na dne jamiek tablety v tvare písmena U. Pri absencii protilátok proti pôvodcovi brušného týfusu tvoria usadené erytrocyty „bod“.
Nastaviť zloženie
Názov činidla | Popis | Množstvo v sade |
---|---|---|
Diagnosticum erythrocyte salmonella Vi-antigénny, suchý 6% (EDC) | Formalizované kuracie erytrocyty senzibilizované Vi-antigénom S. typhi. Suchá hygroskopická hmota hnedej farby. Po rozpustení je suspenzia červenohnedá. | 1 fľaša, 0,6 ml |
Diagnostická séra salmonely adsorbovaná, Vi receptor, suchý (riedenie 1:20, (K +)) | Králičie sérové \u200b\u200bsalmonely adsorbované, Vi receptor, zriedenie 1:20. Suchá hygroskopická biela pórovitá hmota. Po rozpustení - číra nažltlá kvapalina alebo bezfarebná. | 1 fľaša, 0,3 ml |
Riedidlo vzorky (RIP) | Číra modrofialová tekutina. | 1 fľaša, 10 ml |
Fosfátom pufrovaný soľný roztok (PBS) | Priehľadná bezfarebná kvapalina. | 1 fľaša, 10 ml |
Polymérna platňa na jedno použitie pre imunologické reakcie | Polymérna platňa na jedno použitie na imunologické reakcie vyrobená z priehľadného bezfarebného polystyrénu. | 1 ks. |
Diagnostické vlastnosti
Diagnosticum sa má aglutinovať v RPHA diagnostickým sérom adsorbovaným na salmonely, Vi receptorom, suchým (pri zriedení 1:20), na titer uvedený na štítku séra. Podmienená úroveň diagnostických charakteristík krvného séra zdravých ľudí by sa mala považovať za zriedenie séra nie väčšie ako 1:20. Čas analýzy je 3040 minút. Súprava je určená na štúdium 42 krvných sér v skríningovej verzii alebo 10 krvných sér v titračnej verzii.
Preventívne opatrenia
Súprava je určená iba na diagnostické použitie in vitro. Látky obsiahnuté v súprave sú inaktivované a bezpečné. Pri práci so súpravou je potrebné dodržiavať SP 1.3.2322-08 a SanPiN 2.1.7.2790-10.
Dodatočné vybavenie a materiály
Vybavenie, materiály, riešenia:
- jednokanálové pipetovacie dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5 - 40 μl; 40 - 200 μl; 200 - 1 000 μl a 1 000 - 5 000 μl;
- pipetovacie dávkovače 8- alebo 12-kanálové s premenlivým dávkovacím objemom 5 - 40 μl a 40 - 200 μl;
- destilovaná voda (GOST 6709-72).
Analyzované vzorky
Skúmané vzorky krvného séra sa uchovávajú pri teplote 2 až 8 ° C najviac 3 dni od okamihu odberu krvi. Sérum je povolené skladovať v zmrazenom stave pri teplote nepresahujúcej mínus 18 ° С najviac 1 rok. Pred použitím sa vzorky nechajú roztopiť pri teplote 16 až 25 ° C a trepaním sa zmiešajú. Zmrazovanie nie je povolené. Nemali by sa používať vzorky s množením baktérií a hemolýzou. Pred nastavením reakcie sa testované séra 30 minút zahrievajú na 56 ° C.
Analýza
Príprava kontrolného diagnostického séra (K +)
Pripravte pracovný roztok diagnostického séra adsorbovaného na salmonely, Vi receptora, suchého (zriedenie 1:20) z 0,3 ml (K +). Za týmto účelom sa do obsahu fľaštičky s K + pridá 0,3 ml fyziologického roztoku pufrovaného fosfátmi (PBS). Zvyšné množstvo séra je možné rozdeliť na alikvóty a skladovať ich zmrazené pri teplote nepresahujúcej mínus 18 ° C najviac 6 mesiacov.
Príprava diagnostiky erytrocytovej salmonely (EDS)
Na prípravu pracovného zriedenia suspenzie erytrocytovej salmonely diagnostika sa k obsahu fľaštičky so suchým 6% EDMS pridá 0,6 ml destilovanej vody a nechá sa 2 hodiny hydratovať pri teplote 16 až 25 ° C. Potom sa k roztoku pridá 2,4 ml fyziologického roztoku pufrovaného fosfátmi (PBS). Pracovný roztok sa skladuje pri teplote 2 až 8 ° C najviac 1 mesiac. Zmrazovanie nie je povolené.
RPHA staging na skríning krvného séra
Krvné sérum pre skríningové štúdie sa riedi v jamkách doštičky nasledovne:
- predbežné riedenia 1:20 sa pripravia v prvých jamkách doštičky, najskôr sa pridá 190 μl roztoku RIP, potom 10 μl študovaného séra. Každé sérum sa pridá samostatným hrotom a opatrne sa pipetuje (farba roztoku v jamkách po pridaní séra by sa mala zmeniť z modrofialového na zelené);
- v druhej jamke sa pripravia skríningové riedenia 1:40, najskôr sa pridá 25 μl roztoku PBS a potom 25 μl predtým zriedeného séra a opatrne sa pipetuje.
Pri každom nastavení RPHA je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K +. Za týmto účelom sa do 8 otvorov dlhého radu pridá 50 μl roztoku PBS. Potom sa do prvej jamky pridá 50 μl pracovného roztoku K + (1:20), opatrne sa pipetuje a prenesie sa do ďalších jamiek, každá s obsahom 50 μl, pričom sa získajú dvojnásobné zriedenia od 1:40 do 1: 5120. V ďalších 4 jamkách sa pridá 50 ul roztoku PBS na kontrolu SED kvôli absencii spontánnej hemaglutinácie.
Do všetkých jamiek doštičky so skríningovými riedeniami študovaných sér (s výnimkou prvých, ktoré obsahujú RIP) a kontroly pridajte 25 μl EDM. Pred použitím premiešajte suspenziu SED v injekčnej liekovke alebo tácke! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa stáť 30 až 40 minút pri teplote 16 až 25 ° C, kým sa erytrocyty v kontrolnej vzorke úplne usadia.
Formulácia RPHA počas titrácie študovaných krvných sér
Titrácia študovaných sér a pracovného roztoku K + sa uskutočňuje v krátkych radoch doštičky. Ďalší krátky riadok sa používa na kontrolu absencie spontánnej hemaglutinácie EDMS.
Do prvých jamiek s krátkymi radmi na titráciu testovacieho séra sa pridá 180 μl roztoku RIP. Do všetkých ostatných jamiek sa pridá 50 μl roztoku PBS.
Do jamiek s roztokom RIP pridajte 20 μl skúmaného séra (získajte zriedenie 1:10). Každé sérum je pridané svojim vlastným špičkou a opatrne pipetované (farba roztoku v jamkách by sa mala meniť z modro-fialovej na zelenú). Potom sa z prvých jamiek prenesie 50 μl do ďalších jamiek v radoch, pričom sa dostanú dvojnásobné riedenia od 1:20 do 1: 1280. Na konci titrácie sa z posledných jamiek odstránia roztoky v objeme 50 μl.
Pri každom nastavení RPHA je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K +. Za týmto účelom sa do 8 otvorov dlhého radu pridá 50 μl roztoku PBS. Potom sa do prvej jamky pridá 50 μl pracovného roztoku K + (1:20), opatrne sa pipetuje a prenesie sa do ďalších jamiek, každá s obsahom 50 μl, pričom sa získajú dvojnásobné zriedenia od 1:40 do 1: 5120.
Na kontrolu diagnostiky absencie spontánnej hemaglutinácie sa do všetkých jamiek krátkeho radu pridá 50 μl roztoku PBS.
Do všetkých jamiek (s výnimkou prvých jamiek v každom rade pre študované séra obsahujúce RIP) pridajte 25 μl EDM. Pred použitím premiešajte suspenziu SED v injekčnej liekovke alebo tácke! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa stáť 30 až 40 minút pri teplote 16 až 25 ° C, kým sa erytrocyty v kontrolnej vzorke úplne usadia.
Účtovníctvo a interpretácia výsledkov
Zváženie výsledkov pri skríningu krvného séra
Výsledky sa zaznamenávajú podľa konvenčnej stupnice štyroch krížení. Za titer séra sa považuje jeho zriedenie, ktoré vedie k hemaglutinácii najmenej 3-krát (+++).
- ++++ (4+) - aglutinované erytrocyty tvoria na spodnej časti otvoru obrátený „dáždnik“, jeho okraje spadajú;
- +++ (3+) - aglutinované erytrocyty tvoria na spodnej časti otvoru obrátený „dáždnik“, jeho okraje sú rovnomerné;
- ++ (2+) - spolu s aglutinovanými erytrocytmi na dne jamky je usadenina vo forme malého „prstenca“ neaglutinovaných erytrocytov;
- + (1+) - väčšina erytrocytov nie je aglutinovaná a usadzuje sa vo forme malého „krúžku“;
- (-) - neaglutinované erytrocyty tvoria "bod" v spodnej časti otvoru.
Za pozitívny výsledok sa považuje hemaglutinácia erytrocytov naplnených Vi-antigénom najmenej 3 kríženiami (+++).
Kontrola kvality diagnostika je 4 jamky kontrolného radu, do ktorých bol pridaný iba roztok PBS a SED. V týchto jamkách by nemala byť spontánna hemaglutinácia - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala opakovať. Ak sa počas opakovaného nastavenia objaví hemaglutinácia, liek sa nepoužíva.
Séra s negatívnym výsledkom by sa mali považovať za bez protilátok proti Vi-antigénu pri diagnostickom titri 1:40 a menej.
Séra, ktoré dávajú pozitívny výsledok pri zriedení 1:40, by sa mali vo variante znovu testovať titráciou séra, aby sa stanovil jeho titer.
Zváženie výsledkov pri titrácii krvného séra
Titrom séra je jeho zriedenie, pri ktorom sa dosiahne hemaglutinácia nie menej ako 3 (+++).
Kontrola kvality diagnostika je jamka v rade pre kontrolu SED. V týchto jamkách by nemala byť spontánna hemaglutinácia - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala opakovať. Ak sa počas opakovaného nastavenia objaví hemaglutinácia, liek sa nepoužíva.