Diagnosticum eritrocitna salmonela vi antigena. Analitička i dijagnostička izvedba
Cijena: na zahtjev
Proizvod možete dodati u košaricu dodavanjem količine
Skup reagensa Diagnosticum Salmonella VI-antigenski namijenjen je otkrivanju specifičnih antitijela na Wi-antigen Salmonella typhus u ljudskom krvnom serumu u pasivnoj reakciji hemaglutinacije (RPHA).
POSTAVITE KARAKTERISTIKE
2.1. Načelo metode.
Djelatni princip Diagnosticum Salmonella VI-antigena je Vi-antigen, fiksiran na površini eritrocita. Pri interakciji sa serumima koji sadrže antitijela na B-antigen, opaža se fenomen aglutinacije eritrocita.
2.2. SASTAV KITA
Reagensi | broj |
Diagnosticum eritrocit salmonela Vi-antigena tekućina - je 1% suspenzija eritrocita ovna, formalizirana i senzibilizirana Vi-antigenom salmonele tifus u otopini fosfatnog pufera (pH 7,2 + 0,2; koncentracija 0,06 mol / l). Homogena smeđa suspenzija bez pahuljica; nakon taloženja nastaju 2 sloja: gusti smeđi talog eritrocita i prozirni žućkasti supernatant | 1 bočica - 3 ml |
Dijagnostička serumska salmonela adsorbirani receptor VI suhi -homogena masa od bijele sa smećkastom bojom do bež | 1 bočica - od 0,1 ml |
1% suspenzija formaliniziranih, nesenzibiliziranih ovčjih eritrocita - homogena smeđa suspenzija bez pahuljica; nakon taloženja nastaju 2 sloja: gusti smeđi talog eritrocita i prozirni žućkasti supernatant | 1 boca - |
Otopina za razrjeđivanje seruma i proizvodnju RPHA -0,9% otopina natrijevog klorida je bistra bezbojna tekućina, pH 6,5 do 7,5 | 2 bočice - po 8 ml |
Jednokratna ploča s okruglim dnom za imunološke reakcije -sastoji se od 8 redova, od kojih svaki uključuje 12 rupa s prozirnim, bezbojnim, okruglim dnom | 1 računalo |
ANALITIČKE I DIJAGNOSTIČKE KARAKTERISTIKE.
3.1. Diagnosticum treba aglutinirati u RPHA dijagnostičkim serumom Salmonela adsorbirani B i B receptor suh u razrjeđenju od najmanje 1: 160.
Uvjetnom razinom dijagnostičkih karakteristika krvnog seruma zdravih ljudi treba smatrati razrjeđenje seruma ne veće od 1:20.
3.2. Vrijeme analize je 2 sata.
3.3. Set je dizajniran za 8 definicija.
MJERE PREDOSTROŽNOSTI
Pri radu s kompletom treba se pridržavati "Pravila za uređaj, sigurnosnih mjera zaštite, industrijske sanitarije, protuepidemijskog režima i osobne higijene pri radu u laboratorijima (odjelima, odjelima) sanitarnih i epidemioloških ustanova sustava Ministarstva zdravstva SSSR-a (M., 1981.)."
Analiziranim serumima, kao i reagensima koji su u kontaktu s njima, treba smatrati potencijalno zaraznima, sposobnima za održavanje ili prijenos HIV-a, virusa hepatitisa ili bilo kojeg drugog uzročnika virusne infekcije - s njima treba postupati pažljivo:
- rad s gumenim rukavicama;
- prilikom pipetiranja morate koristiti automatske pipete;
- po završetku rada, analizirani serumi i reagensi u kontaktu s njima, instrumente treba obraditi dezinficijensom
- opremu prije i poslije rada obrišite sa 70% etilnim alkoholom.
Analizirani serumi trebaju se inaktivirati na temperaturi od 56 ° C tijekom 30 minuta.
Dijagnostički serum Salmonella adsorbirani B i B receptor uključen u komplet nije inaktiviran.
Objektivni rezultati ispitivanja zajamčeni su u sljedećim uvjetima:
- pohraniti sve reagense kompleta na temperaturi od 2 do 8 0 ° C;
- nemojte koristiti reagense kojima je istekao rok trajanja;
- nemojte koristiti reagense u kompletu ako njihova ambalaža nije odgovarajuće označena;
- za provođenje RPGA koristite reagense koji su uključeni samo u ovaj komplet.
Potvrda o registraciji broj RZN 2016/3905 od 04.04.2016
Ugovoreni sastanak
Skup reagensa "Diagnosticum eritrocitna salmonela Vi-antigen za RPHA" (SED-Vi) namijenjen je otkrivanju antitijela na Vi-antigen uzročnika tifusa u serumu ljudske krvi pasivnom reakcijom hemaglutinacije (RPHA).
Postavite karakteristiku
Princip rada
U prisutnosti antitijela na uzročnika tifusne groznice, opaža se hemaglutinacija pilećih eritrocita senzibiliziranih na vi-antigen, što dovodi do stvaranja "kišobrana" taloženih eritrocita na dnu jažica tablete u obliku slova U. U nedostatku antitijela na uzročnika tifusne groznice, ustaljeni eritrociti čine "točku".
Postavite sastav
Naziv reagensa | Opis | Količina u setu |
---|---|---|
Diagnosticum eritrocit salmonela Vi-antigena, suha 6% (EDC) | Formalinizirani pileći eritrociti senzibilizirani sa S. typhi Vi-antigenom. Suha higroskopna masa smeđe boje. Nakon otapanja, suspenzija je crveno-smeđa. | 1 bočica, od 0,6 ml |
Dijagnostička adsorbirana salmonela u serumu, Vi receptor, suh (razrjeđenje 1:20, (K +)) | Adsorbirana salmonela zečjeg seruma, Vi receptor, razrjeđenje 1:20. Suha higroskopna bijela porozna masa. Nakon otapanja bistra je žućkasta tekućina ili bezbojna. | 1 bočica, od 0,3 ml |
Razrjeđivač uzorka (RIP) | Prozirna plavo-ljubičasta tekućina. | 1 bočica, 10 ml |
Fiziološka otopina u fosfatnom puferu (PBS) | Prozirna bezbojna tekućina. | 1 bočica, 10 ml |
Polimerna ploča za jednokratnu upotrebu za imunološke reakcije | Polimerna pločica za imunološke reakcije za jednokratnu upotrebu izrađena od prozirnog, bezbojnog polistirena. | 1 računalo. |
Dijagnostičke karakteristike
Diagnosticum treba aglutinirati u RPHA dijagnostičkim serumom adsorbiranim salmonelom, Vi receptor, suh (razrjeđenje 1:20), do titra naznačenog na naljepnici seruma. Uvjetnom razinom dijagnostičkih karakteristika krvnog seruma zdravih ljudi treba smatrati razrjeđenje seruma ne veće od 1:20. Vrijeme analize je 3040 minuta. Komplet je namijenjen proučavanju 42 krvna seruma u probirnoj verziji ili 10 krvnih seruma u titracijskoj verziji.
Mjere predostrožnosti
Komplet je namijenjen samo za in vitro dijagnostičku uporabu. Tvari sadržane u kompletu inaktivirane su i sigurne. Pri radu s kompletom treba se pridržavati SP 1.3.2322-08 i SanPiN 2.1.7.2790-10.
Dodatna oprema i materijali
Oprema, materijali, rješenja:
- 1-kanalni dozatori za pipetu s promjenjivim volumenom doziranja od 5 - 40 μl; 40 - 200 μl; 200 - 1000 μl i 1000 - 5000 μl;
- dozatori za pipete 8- ili 12-kanalni s promjenjivim volumenom doziranja od 5 - 40 μl i 40 - 200 μl;
- destilirana voda (GOST 6709-72).
Analizirani uzorci
Istraženi uzorci krvnog seruma čuvaju se na temperaturi od 2 do 8 ° C ne više od 3 dana od trenutka uzimanja uzorka krvi. Dopušteno je čuvati serum u smrznutom stanju na temperaturi koja ne prelazi minus 18 ° S ne duže od 1 godine. Prije upotrebe uzorci se odmrzavaju na temperaturi od 16 do 25 ° C i miješaju se mućkanjem. Ponovno zamrzavanje nije dopušteno. Ne koristite uzorke s bakterijskim rastom i hemolizom. Prije postavljanja reakcije, testirani se serumi zagrijavaju na 56 ° C tijekom 30 minuta.
Analiza
Priprema kontrolnog dijagnostičkog seruma (K +)
Pripremite radnu otopinu dijagnostičkog adsorbiranog salmonele, Vi receptor, suhi (razrjeđenje 1:20) od 0,3 ml (K +). Za to se u sadržaj bočice s K + doda 0,3 ml fiziološke otopine puferirane fosfatom (PBS). Preostala količina seruma može se alikvotirati i smrznuto čuvati na temperaturi koja ne prelazi minus 18 ° C ne više od 6 mjeseci.
Priprema dijagnostike eritrocitne salmonele (EDS)
Da bi se pripremilo radno razrjeđenje suspenzije eritrocitne dijagnostike salmonele, sadržaju bočice sa suhim 6% EDMS-om doda se 0,6 ml destilirane vode i ostavi za hidrataciju 2 sata na temperaturi od 16 do 25 ° C. Zatim se u otopinu doda 2,4 ml fiziološke otopine puferirane fosfatom (PBS). Radna otopina čuva se na temperaturi od 2 do 8 ° C ne više od 1 mjeseca. Zamrzavanje nije dozvoljeno.
RPHA postavljanje za probir krvnog seruma
Krvni serum za probirne studije razrjeđuje se u jamicama s pločama kako slijedi:
- preliminarna razrjeđenja od 1:20 pripremaju se u prvim jamicama ploče, prvo dodajući 190 μl RIP otopine, a zatim 10 μl ispitivanih seruma. Svaki se serum dodaje zasebnim vrhom i pažljivo pipetira (boja otopine u jamicama nakon dodavanja seruma trebala bi se promijeniti iz plavoljubičaste u zelenu);
- u drugim jažicama pripremaju se probirne razrjeđenja od 1:40, prvo se dodaje 25 μl otopine PBS, a zatim 25 μl prethodno razrijeđenih seruma i pažljivo se pipetira.
Pri svakom postavljanju RPHA potrebno je provesti kontrolno određivanje titra K +. Da bi se to učinilo, dodaje se 50 μl otopine PBS u 8 rupa dugog reda. Zatim se u prvu jažicu doda 50 μl radne otopine K + (1:20), pažljivo pipetira i prenese u slijedeće jažice, svaka po 50 μl, dobivajući dvostruko razrjeđenje od 1:40 do 1: 5120. U još 4 jažice dodaje se 50 μl otopine PBS za kontrolu SED zbog odsutnosti spontane hemaglutinacije.
U sve jažice ploče s screening razrjeđenjima ispitivanih seruma (osim onih prvih koji sadrže RIP) i kontrolama dodajte 25 μl EDM. Prije upotrebe promiješajte SED suspenziju u bočici ili ladici! Tableta se temeljito promućka i ostavi na temperaturi od 16 do 25 ° C 30 do 40 minuta dok se eritrociti u kontroli potpuno ne slegnu.
Formulacija RPHA tijekom titracije ispitivanih seruma krvi
Titracija ispitivanih seruma i radne otopine K + provodi se u kratkim redovima ploče. Drugi kratki red koristi se za kontrolu odsutnosti spontane hemaglutinacije EDS-a.
U prve jažice kratkih redova za titraciju test seruma dodajte 180 μl RIP otopine. U sve ostale jažice dodajte 50 μl otopine PBS.
U jažice s RIP otopinom dodajte 20 μl ispitivanih seruma (dobijte razrjeđenje 1:10). Svaki se serum dodaje sa svojim vrhom i pažljivo pipetira (boja otopine u jamicama trebala bi se promijeniti iz plavo-ljubičaste u zelenu). Zatim se iz prvih jažica 50 μl prenese u sljedeće jažice redova, dobivajući dvostruko razrjeđenje od 1:20 do 1: 1280. Na kraju titracije iz posljednjih jažica uklanjaju se otopine u volumenu od 50 μl.
Pri svakom postavljanju RPHA potrebno je provesti kontrolno određivanje K + titra. Da bi se to učinilo, dodaje se 50 μl otopine PBS u 8 rupa dugog reda. Zatim se u prvu jažicu doda 50 μl radne otopine K + (1:20), pažljivo pipetira i prenese u sljedeće jažice, svaka po 50 μl, dobivajući dvostruko razrjeđenje od 1:40 do 1: 5120.
Da bi se kontrolirao dijagnostikum za odsutnost spontane hemaglutinacije, u sve jažice kratkog reda dodaje se 50 μl otopine PBS.
U sve jažice (osim u prve jažice svakog reda za ispitivani serum koji sadrži RIP) dodajte 25 μl EDM. Prije upotrebe promiješajte SED suspenziju u bočici ili ladici! Tableta se temeljito promućka i ostavi na temperaturi od 16 do 25 ° C 30 do 40 minuta dok se eritrociti u kontroli potpuno ne slegnu.
Računovodstvo i tumačenje rezultata
Razmatranje rezultata prilikom probira krvnog seruma
Rezultati se bilježe prema uobičajenoj skali od četiri križanja. Titrom seruma smatra se razrjeđenje koje daje hemaglutinaciju s najmanje 3 (+++) križanja.
- ++++ (4+) - aglutinirani eritrociti tvore obrnuti "kišobran" na dnu rupe, rubovi mu otpadaju;
- +++ (3+) - aglutinirani eritrociti tvore obrnuti "kišobran" na dnu rupe, rubovi su mu ujednačeni;
- ++ (2+) - zajedno s aglutiniranim eritrocitima na dnu bušotine nalazi se i sediment u obliku malog "prstena" neaglutiniranih eritrocita;
- + (1+) - većina eritrocita nije aglutinirana i taloži se u obliku malog "prstena";
- (-) - neaglutinirani eritrociti čine "točku" na dnu rupe.
Pozitivnim rezultatom smatra se hemaglutinacija eritrocita napunjenih Vi-antigenom od najmanje 3 ukrštanja (+++).
Kontrola kvalitete dijagnostike su 4 jažice kontrolnog reda u koje su dodani samo otopina PBS i SED. U tim jažicama ne smije biti spontane hemaglutinacije - reakcija je negativna (-). Inače, studiju treba ponoviti. Ako se hemaglutinacija pojavi tijekom ponovljenog postavljanja, tada se lijek ne koristi.
Serumi s negativnim rezultatom trebaju se smatrati bez protutijela na Vi-antigen pri dijagnostičkom titru od 1:40 i niže.
Serume koji daju pozitivan rezultat u razrjeđenju 1:40 potrebno je ponovno testirati u varijanti sa titracijom seruma kako bi se utvrdio njegov titar.
Razmatranje rezultata pri titriranju krvnog seruma
Titrom seruma smatra se njegovo razrjeđivanje, koje daje hemaglutinaciji najmanje 3 (+++) križanja.
Kontrola kvalitete dijagnostike su jažice reda za SED kontrolu. U tim jažicama ne smije biti spontane hemaglutinacije - reakcija je negativna (-). Inače, studiju treba ponoviti. Ako se hemaglutinacija pojavi tijekom ponovljenog postavljanja, tada se lijek ne koristi.
DIJAGNOSTIKUM (Grčki, diagnostikos sposoban prepoznati) - suspenzije neutraliziranih mikroorganizama koje se koriste kao antigeni za serološke reakcije. Opasnost od rada sa živim kulturama, njihova varijabilnost i prisutnost širokih antigenih veza čine preporučljivom upotrebu D. - standardnijih i homogenijih pripravaka koji sadrže određene antigene komponente.
Uz pomoć D., u reakcijama aglutinacije, pasivne (neizravne) hemaglutinacije (RPHA) itd., U serumima ljudi i životinja otkrivaju se specifična antitijela kako bi se dijagnosticiralo i proučilo imunološko stanje organizma.
D. se posebno široko koristi u laboratorijskim ispitivanjima crijevnih infekcija. Međutim, općenitost antigene strukture crijevnih bakterija određuje prisutnost križnih reakcija i zahtijeva diferencijalno otkrivanje antitijela. U tu se svrhu provodi selektivno suzbijanje pojedinih antigena: uz pomoć fenola ili formalina potiskuje se O-aglutinabilnost, kako su predložili Felix i Olitsky (A. Felix, L. Olitzki, 1928). Djelovanjem s alkoholom prema metodi Vin i Sontag ili zagrijavanjem prema Kauffmannu dobiva se O-dijagnostika s inaktiviranim bičevičkim antigenom. Još je obećavajuća upotreba mono dijagnostika, čiji je princip razvio F.G.Berngoff (1944). Ti lijekovi sadrže samo jednu antigenu komponentu i oni djeluju samo s određenim specifičnim antitijelima.
Prikazana je mogućnost očuvanja svojstava bakterijskih D. njihovom liofilizacijom (vidi).
D., koji se koriste za serodijagnozu različitih infekcija, u osnovi su slični, međutim, određene vrste ovih lijekova imaju određenu specifičnost.
Općenito je prihvaćeno da je RPHA osjetljiviji i specifičniji od bakterijske aglutinacije. Formalinizirani eritrociti senzibilizirani antigenima dobivenim metodama Boivina i Westphala koriste se kao antigeni u RPHA.
Također je moguće koristiti eritrocit D. za otkrivanje antigena u tkivima, ispuštanje bolesnika, ekstrakte različitih tvari itd. U tim slučajevima upotrijebite eritrocite senzibilizirane protutijelima - "dijagnostika protutijela".
Virusni D. koristi se uglavnom u reakciji fiksacije komplementa (RSK), RTGA i reakciji neutralizacije. Pripremaju se od cijepljenih tekućina za kulturu obrađenih (inaktiviranih) na razne načine.
Kratki opis glavnih D. i opseg njihove primjene predstavljeni su u tablici.
Postoje i eksperimentalni lijekovi koji se koriste u znanstvenom radu: eritrocitni kolidijagnostikum, eritrocit difterije D., hemaglutinirajući antigeni virusa zaušnjaka, hemaglutinirajući antigen ospica itd.
Stol. Kratki opis glavnih dijagnostika i svrha njihove primjene
Dijagnostike |
kratki opis |
Svrha primjene (koristi se serum ispitanika) |
Bakterijska dijagnostika |
||
Diagnosticums iz bakterija crijevne obitelji: Shigella Flexner, Sonne, Newcastle; salmonela tifus (OH, O), paratifusna groznica A i B, kolera suis, tifimurij, entertidis |
Suspenzija mikroba (3 milijarde mikroorganizama u 1 ml), inaktivirana s 0,4-0,5% otopine formalina |
Izjava o reakciji aglutinacije radi pojašnjenja klina, dijagnoze bolesti |
O-dijagnostika salmonele (2, 4, 7, 8, 9 i 3, 10) |
Mikrobna suspenzija koja sadrži djelomični O-antigen (3 milijarde mikroorganizama u 1 ml), dobivena od odabranih sojeva, inaktivirana s 15% otopinom glicerina |
Postavljanje reakcije aglutinacije za otkrivanje O-antitijela u salmonelozi |
Salmonela H-monodiagnosticums (a, b, c, d, eh, c, k, lv, gm, p, st i antigeni druge faze - 1, 2, 5, 6, 7) |
Mikrobna suspenzija koja sadrži komponente flagelarnog antigena 1. i 2. faze (3 milijarde mikrobnih tijela u 1 ml), dobivena od odabranih sojeva, inaktivirana s 0,5% -tnom otopinom formalina |
Utvrđivanje reakcije aglutinacije radi otkrivanja H-antitijela u dijagnostičke svrhe i utvrđivanja povijesti bolesti |
Vi-dijagnostik |
Mikrobna suspenzija (3 milijarde mikroorganizama u 1 ml) iz sojeva koji sadrže Vi-faktor, tretirani s 0,4% otopinom formalina i 0,6% otopinom kalcijevog klorida |
Postavljanje reakcije aglutinacije za identificiranje nosača tifusnih bakterija |
Brucellosis single diagnosticum |
Suspenzija brucele u 12% otopini natrijevog klorida, obojena u plava boja i inaktivira se 0,5% -tnom otopinom fenola |
Organiziranje testa aglutinacije (Wrightov i Huddlesonov test za otkrivanje zaraženih ljudi i životinja - vidi Brucelosis, metode istraživanja) |
Tularemia diagnostik |
Mikrobna suspenzija (25 milijardi mikrobnih tijela u 1 ml) soja cjepiva, inaktivirana s 0,5% otopine formalina |
Postavljanje reakcije volumetrijske kapi aglutinacije na staklu za serodijagnostiku i proučavanje imunološkog stanja cijepljenih |
Dijagnostika leptospiroze |
Liofilizirana mikrobna suspenzija 11 sojeva najčešćih serotipova |
Izjava RSK za potvrdu klina, dijagnoze bolesti |
Rickettsial dijagnostika |
Korpuskularni antigeni - suspenzija rikecije uzgojena u vrećicama žumanjaka pilećih zametaka ili plućnom riketijskom materijalu zaraženih glodavaca, tretirana eterom, celitom ili diferencijalnim centrifugiranjem |
Izjava o reakciji aglutinacije za diferencijalnu dijagnozu rikecioza |
Dijagnostika eritrocita tvrtke Shigella Flexner - Sonne |
Formalinizirani eritrociti senzibilizirani antigenima Boivina, Westphala itd. |
Izjava RPGA radi pojašnjenja klinaste "dijagnoze dizenterije |
Salmonela eritrocita Vi-diagnostikum |
Formalinizirani eritrociti senzibilizirani pročišćenim Vi-antigenom |
Izjava RPHA za otkrivanje tifusnog nosača bakterija |
O-dijagnostika salmonele eritrocita (1, 2, 12; 1, 4, 12; 6, 7; 6, 8; 1, 9, 12; 3, 10 i kompleks) |
1% suspenzija formaliniziranih eritrocita osjetljivih na antigene Boivin, Westphal itd. |
Izjava RPHA za pojašnjenje klinaste "dijagnoze bolesti |
Liofilizirani dijagnostički eritrocit tularemije |
Formalinizirani liofilizirani eritrociti senzibilizirani antigenom tularemije |
Izjava RPHA za pojašnjenje klina, dijagnoze tularemije, kao i reakcija neutralizacije antitijela za otkrivanje: antigena |
Dijagnostika virusa |
||
Antigen virusa cjepiva |
Suhi pripravak živog virusa cjepiva uzgojen na horion-alantoičnoj membrani pilećih embrija |
Izjava RPHA za otkrivanje antihemaglutinina u bolesnika i cijepljenih |
Adenovirus specifični antigen |
Pripremljeno uzgojem virusa tipa 6 u transplantabilnoj staničnoj kulturi A-1 (antigen zajednički svim adenovirusima) |
Postavljanje CSC-a za otkrivanje antitijela koja vežu komplement u serumu pacijenata |
Dijagnostika krpeljnog encefalitisa i njemu etiološki sličnih bolesti |
Izjava RSK i RTGA radi pojašnjenja klina, dijagnoze bolesti |
|
Ornitoidni antigen |
Suhi pripravak od kuhanih cijepljenih vrećica žumanjaka pilećih zametaka, ekstrahiran eterom, istaložen acetonom i inaktiviran mertiolatom |
Formulacija RSK za dijagnozu ornitoze kod ljudi, ptica i životinja |
Dijagnostika gripe suha |
Alantoična tekućina u razvoju embriona piletine zaraženih jednim od sojeva virusa gripe tipa A, B ili C, inaktivirana formalinom, mertiolatom. Zbog varijabilnosti antigene strukture virusa gripe, osigurava se česta promjena sojeva proizvodnje. |
Izjava RTGA za pojašnjenje klina, dijagnozu bolesti |
Parainfluenza diagnostik tip 1, 2, 3 za RTGA, suho |
Tekućina za kulturu (ljudski embrionalni bubreg) koja sadrži jedan od sojeva virusa parainfluence, tretirana s tween-80, eterom i merthiolatom |
Izjava RTGA radi pojašnjenja klina, dijagnoze bolesti |
Bibliografija: Zuev AS Bakterijski vi-dijagnostik za otkrivanje kroničnih nosača tifusnih bakterija, Zhurn, micr., Epid i imun., Br. 2, str. 51, 1959, bibliogr.; Zuev AS, Novoselova AI i Likina IV Razvoj tehnike za proizvodnju O-dijagnostika i H-monodiagnostike i njihova primjena u serodijagnostici salmoneloze, ibid., Br. 3, str. 42, 1956; Imunologija i prevencija crijevne infekcije, ur. S.I.Didenko, str. 180, M., 1962; Karalnik BV Eritrocitna dijagnostika, M., 1976 .; Smjernice za mikrobiološku dijagnozu zaraznih bolesti, ur. K. I. Matveeva, str. 172, M., 1973; Subbotina Yu. L. i drugi. Serološka dijagnostika salmoneloze i antigenih veza u reakcijama s eritrocitnim i bakterijskim O-diagnostikumima, Zhurn, micr., Epid i imun., Br. 3, str. 19, 1970, bibliogr.
L. B. Bogoyavlenskaya.
Potvrda o registraciji broj RZN 2016/3905 od 04.04.2016
Ugovoreni sastanak
Skup reagensa "Diagnosticum eritrocitna salmonela Vi-antigen za RPHA" (SED-Vi) namijenjen je otkrivanju antitijela na Vi-antigen uzročnika tifusa u serumu ljudske krvi pasivnom reakcijom hemaglutinacije (RPHA).
Postavite karakteristiku
Princip rada
U prisutnosti antitijela na uzročnika tifusne groznice, opaža se hemaglutinacija pilećih eritrocita senzibiliziranih na vi-antigen, što dovodi do stvaranja "kišobrana" taloženih eritrocita na dnu jažica tablete u obliku slova U. U nedostatku antitijela na uzročnika tifusne groznice, ustaljeni eritrociti čine "točku".
Postavite sastav
Naziv reagensa | Opis | Količina u setu |
---|---|---|
Diagnosticum eritrocit salmonela Vi-antigena, suha 6% (EDC) | Formalinizirani pileći eritrociti senzibilizirani sa S. typhi Vi-antigenom. Suha higroskopna masa smeđe boje. Nakon otapanja, suspenzija je crveno-smeđa. | 1 bočica, od 0,6 ml |
Dijagnostička adsorbirana salmonela u serumu, Vi receptor, suh (razrjeđenje 1:20, (K +)) | Adsorbirana salmonela zečjeg seruma, Vi receptor, razrjeđenje 1:20. Suha higroskopna bijela porozna masa. Nakon otapanja bistra je žućkasta tekućina ili bezbojna. | 1 bočica, od 0,3 ml |
Razrjeđivač uzorka (RIP) | Prozirna plavo-ljubičasta tekućina. | 1 bočica, 10 ml |
Fiziološka otopina u fosfatnom puferu (PBS) | Prozirna bezbojna tekućina. | 1 bočica, 10 ml |
Polimerna ploča za jednokratnu upotrebu za imunološke reakcije | Polimerna pločica za imunološke reakcije za jednokratnu upotrebu izrađena od prozirnog, bezbojnog polistirena. | 1 računalo. |
Dijagnostičke karakteristike
Diagnosticum treba aglutinirati u RPHA dijagnostičkim serumom adsorbiranim salmonelom, Vi receptor, suh (razrjeđenje 1:20), do titra naznačenog na naljepnici seruma. Uvjetnom razinom dijagnostičkih karakteristika krvnog seruma zdravih ljudi treba smatrati razrjeđenje seruma ne veće od 1:20. Vrijeme analize je 3040 minuta. Komplet je namijenjen proučavanju 42 krvna seruma u probirnoj verziji ili 10 krvnih seruma u titracijskoj verziji.
Mjere predostrožnosti
Komplet je namijenjen samo za in vitro dijagnostičku uporabu. Tvari sadržane u kompletu inaktivirane su i sigurne. Pri radu s kompletom treba se pridržavati SP 1.3.2322-08 i SanPiN 2.1.7.2790-10.
Dodatna oprema i materijali
Oprema, materijali, rješenja:
- 1-kanalni dozatori za pipetu s promjenjivim volumenom doziranja od 5 - 40 μl; 40 - 200 μl; 200 - 1000 μl i 1000 - 5000 μl;
- dozatori za pipete 8- ili 12-kanalni s promjenjivim volumenom doziranja od 5 - 40 μl i 40 - 200 μl;
- destilirana voda (GOST 6709-72).
Analizirani uzorci
Istraženi uzorci krvnog seruma čuvaju se na temperaturi od 2 do 8 ° C ne više od 3 dana od trenutka uzimanja uzorka krvi. Dopušteno je čuvati serum u smrznutom stanju na temperaturi koja ne prelazi minus 18 ° S ne duže od 1 godine. Prije upotrebe uzorci se odmrzavaju na temperaturi od 16 do 25 ° C i miješaju se mućkanjem. Ponovno zamrzavanje nije dopušteno. Ne koristite uzorke s bakterijskim rastom i hemolizom. Prije postavljanja reakcije, testirani se serumi zagrijavaju na 56 ° C tijekom 30 minuta.
Analiza
Priprema kontrolnog dijagnostičkog seruma (K +)
Pripremite radnu otopinu dijagnostičkog adsorbiranog salmonele, Vi receptor, suhi (razrjeđenje 1:20) od 0,3 ml (K +). Za to se u sadržaj bočice s K + doda 0,3 ml fiziološke otopine puferirane fosfatom (PBS). Preostala količina seruma može se alikvotirati i smrznuto čuvati na temperaturi koja ne prelazi minus 18 ° C ne više od 6 mjeseci.
Priprema dijagnostike eritrocitne salmonele (EDS)
Da bi se pripremilo radno razrjeđenje suspenzije eritrocitne dijagnostike salmonele, sadržaju bočice sa suhim 6% EDMS-om doda se 0,6 ml destilirane vode i ostavi za hidrataciju 2 sata na temperaturi od 16 do 25 ° C. Zatim se u otopinu doda 2,4 ml fiziološke otopine puferirane fosfatom (PBS). Radna otopina čuva se na temperaturi od 2 do 8 ° C ne više od 1 mjeseca. Zamrzavanje nije dozvoljeno.
RPHA postavljanje za probir krvnog seruma
Krvni serum za probirne studije razrjeđuje se u jamicama s pločama kako slijedi:
- preliminarna razrjeđenja od 1:20 pripremaju se u prvim jamicama ploče, prvo dodajući 190 μl RIP otopine, a zatim 10 μl ispitivanih seruma. Svaki se serum dodaje zasebnim vrhom i pažljivo pipetira (boja otopine u jamicama nakon dodavanja seruma trebala bi se promijeniti iz plavoljubičaste u zelenu);
- u drugim jažicama pripremaju se probirne razrjeđenja od 1:40, prvo se dodaje 25 μl otopine PBS, a zatim 25 μl prethodno razrijeđenih seruma i pažljivo se pipetira.
Pri svakom postavljanju RPHA potrebno je provesti kontrolno određivanje titra K +. Da bi se to učinilo, dodaje se 50 μl otopine PBS u 8 rupa dugog reda. Zatim se u prvu jažicu doda 50 μl radne otopine K + (1:20), pažljivo pipetira i prenese u slijedeće jažice, svaka po 50 μl, dobivajući dvostruko razrjeđenje od 1:40 do 1: 5120. U još 4 jažice dodaje se 50 μl otopine PBS za kontrolu SED zbog odsutnosti spontane hemaglutinacije.
U sve jažice ploče s screening razrjeđenjima ispitivanih seruma (osim onih prvih koji sadrže RIP) i kontrolama dodajte 25 μl EDM. Prije upotrebe promiješajte SED suspenziju u bočici ili ladici! Tableta se temeljito promućka i ostavi na temperaturi od 16 do 25 ° C 30 do 40 minuta dok se eritrociti u kontroli potpuno ne slegnu.
Formulacija RPHA tijekom titracije ispitivanih seruma krvi
Titracija ispitivanih seruma i radne otopine K + provodi se u kratkim redovima ploče. Drugi kratki red koristi se za kontrolu odsutnosti spontane hemaglutinacije EDS-a.
U prve jažice kratkih redova za titraciju test seruma dodajte 180 μl RIP otopine. U sve ostale jažice dodajte 50 μl otopine PBS.
U jažice s RIP otopinom dodajte 20 μl ispitivanih seruma (dobijte razrjeđenje 1:10). Svaki se serum dodaje sa svojim vrhom i pažljivo pipetira (boja otopine u jamicama trebala bi se promijeniti iz plavo-ljubičaste u zelenu). Zatim se iz prvih jažica 50 μl prenese u sljedeće jažice redova, dobivajući dvostruko razrjeđenje od 1:20 do 1: 1280. Na kraju titracije iz posljednjih jažica uklanjaju se otopine u volumenu od 50 μl.
Pri svakom postavljanju RPHA potrebno je provesti kontrolno određivanje K + titra. Da bi se to učinilo, dodaje se 50 μl otopine PBS u 8 rupa dugog reda. Zatim se u prvu jažicu doda 50 μl radne otopine K + (1:20), pažljivo pipetira i prenese u sljedeće jažice, svaka po 50 μl, dobivajući dvostruko razrjeđenje od 1:40 do 1: 5120.
Da bi se kontrolirao dijagnostikum za odsutnost spontane hemaglutinacije, u sve jažice kratkog reda dodaje se 50 μl otopine PBS.
U sve jažice (osim u prve jažice svakog reda za ispitivani serum koji sadrži RIP) dodajte 25 μl EDM. Prije upotrebe promiješajte SED suspenziju u bočici ili ladici! Tableta se temeljito promućka i ostavi na temperaturi od 16 do 25 ° C 30 do 40 minuta dok se eritrociti u kontroli potpuno ne slegnu.
Računovodstvo i tumačenje rezultata
Razmatranje rezultata prilikom probira krvnog seruma
Rezultati se bilježe prema uobičajenoj skali od četiri križanja. Titrom seruma smatra se razrjeđenje koje daje hemaglutinaciju s najmanje 3 (+++) križanja.
- ++++ (4+) - aglutinirani eritrociti tvore obrnuti "kišobran" na dnu rupe, rubovi mu otpadaju;
- +++ (3+) - aglutinirani eritrociti tvore obrnuti "kišobran" na dnu rupe, rubovi su mu ujednačeni;
- ++ (2+) - zajedno s aglutiniranim eritrocitima na dnu bušotine nalazi se i sediment u obliku malog "prstena" neaglutiniranih eritrocita;
- + (1+) - većina eritrocita nije aglutinirana i taloži se u obliku malog "prstena";
- (-) - neaglutinirani eritrociti čine "točku" na dnu rupe.
Pozitivnim rezultatom smatra se hemaglutinacija eritrocita napunjenih Vi-antigenom od najmanje 3 ukrštanja (+++).
Kontrola kvalitete dijagnostike su 4 jažice kontrolnog reda u koje su dodani samo otopina PBS i SED. U tim jažicama ne smije biti spontane hemaglutinacije - reakcija je negativna (-). Inače, studiju treba ponoviti. Ako se hemaglutinacija pojavi tijekom ponovljenog postavljanja, tada se lijek ne koristi.
Serumi s negativnim rezultatom trebaju se smatrati bez protutijela na Vi-antigen pri dijagnostičkom titru od 1:40 i niže.
Serume koji daju pozitivan rezultat u razrjeđenju 1:40 potrebno je ponovno testirati u varijanti sa titracijom seruma kako bi se utvrdio njegov titar.
Razmatranje rezultata pri titriranju krvnog seruma
Titrom seruma smatra se njegovo razrjeđivanje, koje daje hemaglutinaciji najmanje 3 (+++) križanja.
Kontrola kvalitete dijagnostike su jažice reda za SED kontrolu. U tim jažicama ne smije biti spontane hemaglutinacije - reakcija je negativna (-). Inače, studiju treba ponoviti. Ako se hemaglutinacija pojavi tijekom ponovljenog postavljanja, tada se lijek ne koristi.