Diagnostikum eritrotsitik salmonella vi antijenik. Analitik va diagnostika ko'rsatkichlari
Narxi: iltimosiga binoan
Miqdorni ko'rsatib, mahsulotingizni savatga qo'shishingiz mumkin
Salmonella VI-antigenik diagnostik reaktivlari passiv gemagglutinatsiya reaktsiyasida (RPHA) inson qon zardobida Salmonella tif Vi-antijeni uchun aniq antikorlarni aniqlash uchun mo'ljallangan.
Xarakteristikani o'rnating
2.1. Usulning printsipi.
Diagnosticum Salmonella VI-antijenikning faol printsipi bu eritrotsitlar yuzasiga o'rnatilgan Vi-antijen. B-antijeniga antikorlarni o'z ichiga olgan zardob bilan o'zaro ta'sirlashganda, eritrotsitlar aglutinatsiyasi fenomeni kuzatiladi.
2.2. KITOZNING TARKIBI
Reaktivlar | miqdori |
Diagnostikum eritrotsitlar salmonellalari Vi-antijenik suyuqlik - Salmonella tifusining Vi-antijeni bilan fosfat bufer eritmasida formallashtirilgan va sezgirlangan qo'chqor eritrositlarining 1% suspenziyasi (pH 7.2) + 0,2; konsentratsiyasi 0,06 mol / l). Yoriqsiz bir hil jigarrang süspansiyon; joylashgandan so'ng 2 qatlam hosil bo'ladi: eritrotsitlarning zich jigarrang cho'kindi va shaffof sarg'ish g'ayritabiiy | 1 shisha - 3 ml |
Diagnostik zardobdagi salmonellalar adsorblangan Vi retseptorlari quruq -oqdan jigar ranggacha sarg'ish ranggacha bir hil massa | 1 shisha - 0,1 ml dan |
Formalangan, sezgir bo'lmagan qo'y eritrotsitlarining 1% suspenziyasi - bir hil jigarrang süspansiyon; joylashgandan so'ng 2 qatlam hosil bo'ladi: eritrotsitlarning zich jigarrang cho'kindi va shaffof sarg'ish g'ayritabiiy | 1 shisha - |
Sarumni suyultirish va RPHA ni ishlab chiqarish -0,9% natriy xlorid eritmasi aniq rangsiz suyuqlikdir, pH 6,5 dan 7,5 gacha | 2 shisha - har biri 8 ml |
Immunologik reaktsiyalar uchun bitta ishlatiladigan dumaloq taglikli plastinka -8 qatordan iborat bo'lib, ularning har biri shaffof, rangsiz, yumaloq tubi bo'lgan 12 teshikdan iborat | 1 ta kompyuter |
ANITITIK VA DIAGNOSTIK XARAKTERISTIKA.
3.1. Diagnostikumni Salmonella adsorbsiya qilingan B va B retseptorlari zardobida RPHAda kamida 1: 160 nisbatda suyultirish kerak.
Sog'lom odamlarning qon zardobini diagnostik xususiyatlarining shartli darajasi sarumning suyultirilishi 1:20 dan yuqori bo'lmasligi kerak.
3.2. Tahlil vaqti 2 soat.
3.3. To'plam 8 ta ta'rif uchun mo'ljallangan.
EHTIYOT CHORALARI
Kit bilan ishlaganda "SSSR Sog'liqni saqlash vazirligi tizimidagi sanitariya-epidemiologiya muassasalarining laboratoriyalarida (bo'limlari, bo'limlari) ishlayotganda" Qurilma, xavfsizlik choralari, sanoat sanitariyasi, epidemiyaga qarshi rejim va shaxsiy gigiena qoidalariga "rioya qilish kerak (M., 1981).
Tahlil qilingan sarum, shuningdek ular bilan aloqa qiladigan reaktivlar OITV, gepatit virusi yoki boshqa virusli infektsiyani qo'zg'atuvchi yoki uzoq vaqt davomida ushlab turadigan potentsial yuqumli deb hisoblanadi - ularga ehtiyotkorlik bilan munosabatda bo'lish kerak:
- rezina qo'lqop bilan ishlash;
- pipetka qo'yish paytida siz avtomatik pipetkalardan foydalanishingiz kerak;
- ish tugagandan so'ng tahlil qilingan zardob va ular bilan aloqa qiladigan reagentlar, asboblar dezinfektsiyali eritma bilan ishlov berilishi kerak.
- uskunani 70% etil spirti bilan ishlashdan oldin va keyin artib oling.
Tahlil qilingan zardobni 56 min C da 30 minut davomida faolsizlantirish kerak.
Kitga kiritilgan Salmonella diagnostik sarum adsorbsiyalangan B va B retseptorlari faol emas.
Ob'ektiv sinov natijalari quyidagi shartlarda kafolatlanadi:
- to'plamning barcha reaktivlarini 2 dan 8 0 S gacha bo'lgan haroratda saqlang;
- muddati o'tgan reaktivlardan foydalanmang;
- to'plamdagi reagentlardan foydalanmang, agar ularning o'rashlari tegishli ravishda belgilanmagan bo'lsa;
- faqat ushbu to'plamga kiritilgan reagentlardan RPGA o'tkazish.
Ro'yxatga olish to'g'risidagi guvohnoma № RZN 2016/3905, 04.04.2016 y
Uchrashuv
"RPHA uchun eritrositik salmonella Vi-antijeni diagnostikasi" (SED-Vi) reaktivlar to'plami passiv gemagglutinatsiya reaktsiyasi (RPHA) orqali inson qon zardobidagi tifo qo'zg'atuvchisi Vi-antijeniga antikorlarni aniqlash uchun mo'ljallangan.
Belgilarni o'rnating
Operatsion printsipi
Tif isitmasi qo'zg'atuvchisiga antijismlar mavjud bo'lganda, vi-antijinga sezgir tovuq eritrotsitlarining gemagglutinatsiyasi kuzatiladi, bu planshetning U shaklidagi quduqlari tubida joylashtirilgan eritrotsitlarning "soyaboni" paydo bo'lishiga olib keladi. Tif isitmasi qo'zg'atuvchisiga antikorlar bo'lmaganda, o'rnatilgan eritrotsitlar "nuqta" hosil qiladi.
Tarkibni o'rnating
Reaktiv nomi | Ta'rif | To'plamdagi miqdor |
---|---|---|
Salmonella eritrositlari diagnostikasi Vi-antijenik, quruq 6% (EDC) | Shakllangan tovuq eritrositlari S. typhi Vi-antijeni bilan sezgirlanadi. Quruq jigar rangdagi gigroskopik massa. Eritgandan so'ng, suspenziya qizil-jigarrang rangga ega. | 1 shisha, 0,6 ml |
Zardobli salmonellalar diagnostikasi, Vi retseptorlari, quruq (suyultirish 1:20, (K +)) | Quyon zardobidagi salmonellalar adsorblangan, Vi retseptorlari, suyultirish 1:20. Quruq gigroskopik oq gözenekli massa. Eritilganidan keyin bu aniq sarg'ish suyuqlik yoki rangsiz. | 1 shisha, 0,3 ml dan |
Namlik eritgich (RIP) | Tiniq ko'k-binafsha suyuqlik. | 1 shisha, 10 ml |
Fosfat tamponlangan sho'r (PBS) | Shaffof rangsiz suyuqlik. | 1 shisha, 10 ml |
Immunologik reaktsiyalar uchun bitta ishlatiladigan polimer plastinka | Shaffof rangsiz polistiroldan tayyorlangan immunologik reaktsiyalar uchun bir martali ishlatiladigan polimer plastinka. | 1 ta kompyuter. |
Diagnostik xususiyatlar
Diagnostikumni RPHA-da diagnostik salmonellalar adsorbsiyalangan sarum, Vi retseptorlari, quruq (zaryad 1:20), sarum yorlig'ida ko'rsatilgan titrga biriktirish kerak. Sog'lom odamlarning qon zardobini diagnostik xususiyatlarining shartli darajasi sarumning suyultirilishi 1:20 dan yuqori bo'lmasligi kerak. Tahlil vaqti 3040 minut. To'plam skrining versiyasida 42 ta qon seriyasini yoki titrlash versiyasida 10 ta qon zardobini o'rganish uchun mo'ljallangan.
Ehtiyot choralari
To'plam faqat in vitro diagnostikasi uchun mo'ljallangan. Kitga kiritilgan moddalar inaktiv va xavfsizdir. To'plam bilan ishlashda SP 1.3.2322-08 va SanPiN 2.1.7.2790-10 qoidalariga rioya qilish kerak.
Qo'shimcha uskunalar va materiallar
Uskunalar, materiallar, echimlar:
- o'zgaruvchan dozalash hajmi 5 - 40 mkl bo'lgan 1 kanalli pipetka dispenserlari; 40 - 200 mkl; 200 - 1000 mkl va 1000 - 5000 mkl;
- o'zgaruvchan dozalash hajmi 5 - 40 mkl va 40 - 200 mkl bo'lgan 8- yoki 12 kanalli dispenser dispenserlari;
- distillangan suv (GOST 6709-72).
Tahlil qilingan namunalar
Tekshirilgan qon zardobidagi namunalar 2 dan 8 ° C gacha bo'lgan haroratda qon olingan paytdan boshlab 3 kundan ko'p bo'lmagan muddatda saqlanadi. Zardobni muzlatilgan holatda, minus 18 ° C dan yuqori bo'lmagan haroratda 1 yildan ko'p bo'lmagan muddatga saqlashga ruxsat beriladi. Ishlatishdan oldin namunalar 16-25 ° C haroratda eriydi va chayqatish bilan aralashtiriladi. Qayta muzlatishga yo'l qo'yilmaydi. Bakterial o'sishi va gemolizi bo'lgan namunalarni ishlatmaslik kerak. Reaktsiyani boshlashdan oldin sinovdan o'tgan zardobni 56 ° C da 30 daqiqa davomida isitiladi.
Tahlil
Nazorat diagnostik zardobini tayyorlash (K +)
0,3 ml (K +) dan salmonellalarning adsorblangan sarumini, Vi retseptorlarini, quruq (suyultirish 1:20) ishchi eritmasini tayyorlang. Buning uchun K + bilan flakon tarkibiga 0,3 ml fosfat tamponlangan sho'r (PBS) qo'shiladi. Qolgan zardob miqdorini olish va muzlatish natijasida minus 18 ° C dan yuqori bo'lmagan haroratda 6 oy davomida saqlash mumkin.
Eritrosit salmonellalar (EDS) diagnostikasini tayyorlash
Eritrositik salmonellalar diagnostikasining suspenziyasini ishchi seyreltini tayyorlash uchun quruq 6% EDMSli flakon tarkibiga 0,6 ml distillangan suv qo'shiladi va 16-25 ° C haroratda 2 soat davomida namlanadi. Keyin eritmaga 2,4 ml fosfat tampon eritmasi (PBS) qo'shiladi. Ishchi eritma 2 dan 8 ° C gacha bo'lgan haroratda 1 oydan ko'p bo'lmagan muddatda saqlanadi. Muzlatishga yo'l qo'yilmaydi.
Qon zardobini skriningi uchun RPHA bosqichi
Tekshiruv uchun qon zardoblari plastinka quduqlarida quyidagicha suyultiriladi:
- 1:20 ning dastlabki eritmalari plastinkaning birinchi quduqlarida tayyorlanadi, avval 190 mkl RIP eritmasi, so'ngra 10 mkl o'rganilgan zardob qo'shiladi. Har bir sarum alohida uchi bilan qo'shiladi va ehtiyotkorlik bilan tomiziladi (zardob qo'shilgandan keyin quduqlardagi eritma rangi ko'k-binafsha rangdan yashil rangga o'zgarishi kerak);
- 1: 40 skrining eritmalari ikkinchi quduqlarda avval 25 mkl PBS eritmasi, so'ngra 25 mkl oldin suyultirilgan zardobni va pipetkani yaxshilab qo'shib tayyorlanadi.
RPHA-ning har bir o'rnatilishida K + titrini nazorat qilish aniqligini o'tkazish kerak. Buning uchun uzun qatorning 8 teshigiga 50 mkl PBS eritmasi qo'shiladi. Keyin birinchi quduqqa 50 mkl K + ishchi eritmasi (1:20) qo'shiladi, yaxshilab tomiziladi va keyingi quduqlarga o'tkaziladi, har biri 50 mk, 1:40 dan 1: 5120 gacha 2 barobar eritmalar olinadi. Boshqa 4 quduqda o'z-o'zidan gemaglutinatsiya yo'qligi uchun SEDni boshqarish uchun 50 mkl PBS eritmasi qo'shiladi.
Tekshirilgan zardobning skrining suyultirilishi bilan plastinkaning barcha quduqlariga (RIP tarkibiga ega bo'lganlar bundan mustasno) va boshqaruv elementlari 25 mkl EDM qo'shadi. Ishlatishdan oldin SED suspenziyasini flakonda yoki patnisda aralashtiring! Planshet yaxshilab silkitiladi va 16-25 ° C haroratda 30-40 minut davomida nazoratdagi eritrotsitlar to'liq o'rnatilgunga qadar qoldiriladi.
O'rganilgan qon zardobini titrlashda RGHni shakllantirish
O'rganilgan zardobni va ishchi eritmani Titrlash plastinkaning qisqa qatorlarida amalga oshiriladi. Boshqa qisqa satr ERIning o'z-o'zidan gemaglutinatsiyasining yo'qligini nazorat qilish uchun ishlatiladi.
Sinov zardobini titrlash uchun qisqa qatorlarning birinchi quduqlariga 180 mkl RIP eritmasi qo'shiladi. Qolgan barcha quduqlar 50 mkl PBS eritmasini qo'shadilar.
RIP eritmasi bilan quduqlarga, o'rganilgan zardobdan 20 mkl qo'shing (1:10 suyultirishni oling). Har bir sarum o'ziga xos uchi bilan qo'shiladi va ehtiyotkorlik bilan tomiziladi (quduqlardagi eritma rangi ko'k-binafsha rangdan yashil rangga o'zgarishi kerak). Keyin, birinchi quduqlardan, 50 mkl satrlarning keyingi quduqlariga o'tkazilib, 1:20 dan 1: 1280 gacha ikki marta seyreltilir. Titrlash oxirida 50 mkl hajmdagi eritmalar oxirgi quduqlardan chiqariladi.
RPHA-ning har bir o'rnatilishida K + titerini nazorat qilish aniqligini o'tkazish kerak. Buning uchun uzun qatorning 8 teshigiga 50 mkl PBS eritmasi qo'shiladi. Keyin, birinchi quduqqa 50 mkl K + ish eritmasi (1:20) qo'shiladi, yaxshilab tomiziladi va keyingi quduqlarga o'tkaziladi, har biri 50 mk, 1:40 dan 1: 5120 gacha 2 barobar eritmalar olinadi.
Spontan gemaglutinatsiya yo'qligi uchun tashxis qo'yish uchun qisqa qatorning barcha quduqlariga 50 mkl PBS eritmasi qo'shiladi.
Barcha quduqlarda (RIPni o'z ichiga olgan seriya uchun har bir qatorning birinchi quduqlaridan tashqari) 25 mkl EDM qo'shiladi. Ishlatishdan oldin SED suspenziyasini flakonda yoki patnisda aralashtiring! Planshet yaxshilab silkitiladi va 16-25 ° C haroratda 30-40 minut davomida nazoratdagi eritrotsitlar to'liq o'rnatilgunga qadar qoldiriladi.
Buxgalteriya hisobi va natijalarni talqin qilish
Qon zardobini tekshirganda natijalarni hisobga olish
Natijalar to'rtta xochning an'anaviy shkalasi bo'yicha qayd etiladi. Sarumning titrini uning suyultirilishi hisoblanadi, bu esa kamida 3 (+++) xoch orqali gemaglutinatsiyani ta'minlaydi.
- ++++ (4+) - aglutinlangan eritrotsitlar teshikning pastki qismida teskari "soyabon" hosil qiladi, uning qirralari tushadi;
- +++ (3+) - aglutinlangan eritrotsitlar teshikning pastki qismida teskari "soyabon" hosil qiladi, uning qirralari teng;
- ++ (2+) - quduq tubida aglutinlangan eritrotsitlar bilan bir qatorda, aglutinlanmagan eritrotsitlarning mayda "halqasi" shaklida cho'kindi hosil bo'ladi;
- + (1+) - eritrotsitlarning aksariyati aglutinlanmaydi va mayda "halqalar" shaklida joylashadi;
- (-) - aglutinlanmagan eritrotsitlar quduq tubida "nuqta" hosil qiladi.
Vi-antijeni bilan kamida 3 ta xoch (+++) bilan to'ldirilgan eritrotsitlarning gemagglutinatsiyasi ijobiy natija hisoblanadi.
Diagnostikaning sifat nazorati 4 ta nazorat qatoridagi quduq bo'lib, unga faqat PBS eritmasi va SED qo'shilgan. Ushbu quduqlarda o'z-o'zidan gemagglutinatsiya bo'lmasligi kerak - reaktsiya salbiy (-). Aks holda, ish takrorlanishi kerak. Agar takroriy tayinlash paytida gemaglutinatsiya paydo bo'lsa, u holda preparat ishlatilmaydi.
Salbiy natijaga ega sera Vi-antijeni antijismlarsiz, 1:40 va undan past bo'lgan diagnostik titrda ko'rib chiqilishi kerak.
1:40 ni suyultirishda ijobiy natija beradigan sera, uning titrini aniqlash uchun sarum titratsiyasi bilan variantda qayta tekshirilishi kerak.
Qon zardobini titrlashda natijalarni hisobga olish
Sarumning titri bu suyultirish bo'lib, gemaglutinatsiya kamida 3 (+++) xochni beradi.
Diagnostikaning sifat nazorati bu SED nazorati uchun ketadigan quduqdir. Ushbu quduqlarda o'z-o'zidan gemagglutinatsiya bo'lmasligi kerak - reaktsiya salbiy (-). Aks holda, ish takrorlanishi kerak. Agar takroriy tayinlash paytida gemaglutinatsiya paydo bo'lsa, u holda preparat ishlatilmaydi.
DIAGNOSTIKA (Yunoncha, tanib olishga qodir diagnostikos) - serologik reaktsiyalar uchun antigen sifatida ishlatiladigan zararsizlantirilgan mikroorganizmlarning süspansiyonları. Tirik madaniyatlar bilan ishlash xavfliligi, o'zgaruvchanlik qobiliyati va keng antijenik birikmalar mavjudligi D.dan foydalanishni tavsiya qiladi - ma'lum antijenik tarkibiy qismlarni o'z ichiga olgan standart va bir hil preparatlar.
Agglyutinatsiya, passiv (bilvosita) gemagglyutinatsiya (RPHA) va boshqalarning reaktsiyalarida D. yordamida odam va hayvonlarning qon zardobida tananing immunitet holatini aniqlash va o'rganish uchun o'ziga xos antikorlar aniqlanadi.
D. ayniqsa, ichak infektsiyalari uchun laboratoriya ishlarida keng qo'llaniladi. Ammo ichak bakteriyalarining antijenik tuzilishining umumiyligi o'zaro ta'sirlanish reaktsiyalarining mavjudligini aniqlaydi va antikorlarni differentsial aniqlashni talab qiladi. Buning uchun individual antijenlarni selektiv bostirish amalga oshiriladi: fenol yoki formalin yordamida ular Feliks va Olitskiy tomonidan tavsiya etilgan O-aglutinabilitatsiyasini bostiradilar (A. Feliks, L. Olitzki, 1928). Wien va Sontag usulida alkogol bilan ta'sir qilish yoki Kauffmann tomonidan qizdirish orqali faol bo'lmagan bayroq antijeni bo'lgan O-diagnostikalari olinadi. Mono diagnostikasidan foydalanish yanada istiqbolli bo'lib, uni yaratish printsipi F.G.Berngoff tomonidan ishlab chiqilgan (1944). Ushbu dorilar faqat bitta antijenik tarkibiy qismni o'z ichiga oladi va ular faqat ma'lum bir antijismlar bilan o'zaro ta'sirlashadi.
Bakterial D.ning xususiyatlarini ularni liyofilizatsiyalash orqali saqlab qolish imkoniyati ko'rsatilgan (qarang).
D., turli xil infektsiyalarni serodiagnozlashda ishlatiladigan printsipial jihatdan o'xshashdir, ammo ushbu dorilarning ayrim turlari ma'lum bir o'ziga xos xususiyatga ega.
RPHA bakterial aglyutinatsiyaga qaraganda ancha sezgir va o'ziga xos ekanligi odatda qabul qilinadi. Boivin va Vestfal usullari bilan olingan antijenler bilan sezgirlangan formallashtirilgan eritrotsitlar RPHAda antijenalar sifatida ishlatiladi.
To'qimalarda antijenni aniqlash, bemorlarning bo'shatilishi, turli moddalarning ekstrakti va boshqalarni aniqlash uchun eritrotsitlar D. dan foydalanish mumkin. Bunday hollarda antikorlar bilan sezgirlangan eritrositlardan foydalaning - "antikor diagnostikasi".
Virusli D. asosan komplement fiksatsiyasi (RSK), RTGA va neytrallash reaktsiyasida qo'llaniladi. Ular turli usullar bilan qayta ishlangan (inaktivatsiya qilingan) vaktsinatsiya qilingan suyuqliklardan tayyorlanadi.
Asosiy D.ning qisqacha tavsifi va ularni qo'llash sohasi jadvalda keltirilgan.
Ilmiy ishlarda eksperimental dorilar ham qo'llaniladi: eritrotsitlar kolidiagnostikumlari, difteriya eritrotsitlar D., tepki viruslarining antigenlari, qizamiq gemagglutinator antijeni va boshqalar.
Jadval. Asosiy diagnostikalarning qisqacha tavsifi va ularni qo'llash maqsadi
Diagnostika |
qisqacha tavsifi |
Qo'llash maqsadi (mavzu zardobidan foydalaniladi) |
Bakterial diagnostika |
||
Ichak oilasining bakteriyalaridan olingan diagnostika: Shigella Flexner, Sonne, Nyukasl; salmonella tif (OH, O), A va B paratifoid isitmasi, vabo kasalligi, tifimuriya, entertidis |
0,4-0,5% formalin eritmasi bilan inaktivatsiyalangan mikrobial suspenziya (1 ml ichidagi 3 milliard mikrob tanasi) |
Yivni, kasallik tashxisini aniqlashtirish uchun aglutinatsiya reaktsiyasining bayonoti |
Salmonella diagnostikasi (2, 4, 7, 8, 9 va 3, 10) |
Tanlangan shtammlardan olingan qisman O-antijeni (3 ml mikrob tanasi) mikrobial suspenziya, 15% glitserin eritmasi bilan inaktivatsiyalanadi |
Salmonellyozda O-antikorlarni aniqlash uchun aglutinatsiya reaktsiyasini o'rnatish |
Salmonella H-monodiagnostikumlari (a, b, c, d, eh, c, k, lv, gm, p, st va ikkinchi fazaning antijenlari - 1,2, 5, 6, 7) |
Tanlangan shtammlardan olingan 1 va 2-bosqich fazali antijeni (3 ml mikrob tanasi) tarkibiy qismlarini o'z ichiga olgan mikrobial suspenziya, 0,5% formalin eritmasi bilan ishlamaydi. |
Diagnostika maqsadida H-antikorlarni aniqlash va kasallik tarixini aniqlash uchun aglutinatsiya reaktsiyasini o'tkazish |
Vi-diagnostikum |
0,4% formalin eritmasi va 0,6% kaltsiy xlorid eritmasi bilan ishlov berilgan Vi-faktor o'z ichiga olgan shtammlardan mikrobial suspenziya (1 ml hajmdagi 3 milliard mikrob tanasi) |
Tifo bakteriyasini tashuvchisini aniqlash uchun aglutinatsiya reaktsiyasini o'rnatish |
Brutsellyozning yagona tashxisi |
12% natriy xlorid eritmasida, rangli ko'k rangda va 0,5% fenol eritmasi bilan inaktivatsiyalangan brusella suspenziyasi |
Aglutinatsiya sinovini o'tkazish (Rayt testi va Xuddlesonning yuqtirgan odamlar va hayvonlarni aniqlash uchun sinovi - brutsellyoz, tadqiqot usullariga qarang) |
Tulyaremiya diagnostikasi |
Vaktsin shtammining mikrobial suspenziyasi (25 milliard mikrob tanasi) 0,5% formalin eritmasi bilan inaktivatsiyalangan |
Serodiagnostika va vaktsinatsiya qilinganlarning immunitetini o'rganish uchun stakanga tomchilab tushadigan aglutinatsiya reaktsiyasining bayoni |
Leptospiroz diagnostikasi |
Eng keng tarqalgan serotiplarning 11 shtammini lyofilizatsiyalangan mikrobial suspenziya |
Rukni tasdiqlash, kasallik tashxisini olish uchun ariza |
Rikkotsial diagnostika |
Korpuskulyar antijenler - efir, selit yoki differentsial santrifüj bilan ishlov berilgan, yuqtirilgan kemiruvchilardan olingan tovuq embrionlari yoki o'pka riktsitsial moddasining sarig'i qoplarida o'stirilgan riktsitsiyaning to'xtatilishi. |
Rikottsiozlarning differentsial diagnostikasi uchun aglyutinatsiya reaktsiyasining bayoni |
Eritrotsitlar diagnostikasi |
||
Shigella Flexner - Sonne tomonidan eritrotsitlar diagnostikasi |
Boivin, Vestfal va boshqalarning antijenlari bilan sezgirlangan formallashtirilgan eritrotsitlar. |
RPGA ning "dizenteriya tashxisini" aniqlashtirish uchun bayonoti |
Eritrositlar salmonellalari Vi-diagnostikum |
Formalanganlashtirilgan eritrotsitlar tozalangan Vi-antijeni bilan sezgirlanadi |
Tifoid bakterial tashilishini aniqlash uchun RPHA bayonoti |
Eritrositlar salmonellalarini diagnostikasi (1, 2, 12; 1, 4, 12; 6, 7; 6, 8; 1, 9, 12; 3, 10 va murakkab) |
Boivin, Vestfal va boshqalarning antijenlari bilan sezgirlangan rasmiylashtirilgan eritrotsitlarning 1% suspenziyasi. |
RPHA ning kasallikning tashxisini aniqlashtirish uchun bayonoti |
Liyofilizatsiya qilingan tularemiya eritrosit tashxisi |
Tulyaremiya antijeni bilan sensibilizatsiya qilingan lyofilizatsiyalangan eritrositlar |
RPHA ning aniqlanishi, tulyaremiya tashxisini, shuningdek antijismlarni aniqlash uchun antikorlarni neytrallash reaktsiyasini aniqlash bo'yicha bayonoti |
Virus diagnostikasi |
||
Emlash virusi antijeni |
Tovuq embrionlarining xorion-allantoik membranasida o'stirilgan jonli vaktsinatsiya virusini quruq tayyorlash |
Bemorlarda va emlanganlarda anthemagglutininlarni aniqlash bo'yicha RPHA bayonoti |
Adenovirusning o'ziga xos antijeni |
Transplantatsiya qilinishi mumkin bo'lgan A-1 hujayra kulturasida 6 turdagi virusni etishtirish orqali tayyorlangan (barcha adenoviruslarga xos bo'lgan antijen) |
Bemorlarning zardobida komplementni bog'laydigan antikorlarni aniqlash uchun CSC preparati |
Shomil ensefaliti va unga o'xshash etiologik kasalliklarning diagnostikasi |
Retseptsiya va kasallik tashxisini aniqlash uchun RSK va RTGA bayonoti |
|
Ornitoid antijeni |
Tovuq embrionlarining qaynatilgan vaktsinatsiyalangan sarig'i qoplaridan, efir bilan olingan, atseton bilan eritilgan va mertiiolat bilan inaktivatsiyalangan quruq preparat |
Odamlarda, qushlarda va hayvonlarda ornitoz tashxisi uchun RSKni shakllantirish |
Gripp diagnostikasi quruq |
Rivojlanayotgan tovuq embrionlarining allantoy suyuqligi A, B yoki C gripp virusi shtammlaridan biri bilan yuqtirilgan, formalin bilan faollashtirilmagan, mertiiolat. Gripp virusi antijenik tuzilishining o'zgaruvchanligi tufayli ishlab chiqarish shtammlarining tez-tez o'zgarishi ta'minlanadi. |
Rivojlanishni aniqlaydigan RTGA bayonoti, kasallik tashxisi |
Paraginfluenza diagnostikum turi RTGA uchun 1, 2, 3, quruq |
Parainfluenza virusining shtammlaridan biri bo'lgan, o'n ikki-80, eter va merthiolat bilan ishlov berilgan suyuqlik (insonning embrional buyragi). |
Rivojlanishni, kasallik tashxisini aniqlashtirish uchun RTGA bayonoti |
Bibliografiya: Zuev A. S. Tifo bakteriyalarining surunkali tashuvchilarini aniqlash uchun bakterial vi-diagnostikum, Jurn, mikr., Epid va immun., № 2, p. 51, 1959, bibliogr.; Zuev AS, Novoselova AI va Likina IV O-tashxis qo'yish va H-monodiagnostikalarni ishlab chiqarish va ularni salmonellyozning serodiagnostikasida qo'llash usulini ishlab chiqish, ibid, № 3, p. 195, 1956; Immunologiya va ichak infektsiyalarining oldini olish, tahr. S.I.Didenko, b. 180, M., 1962; Karalnik BV Eritrotsit diagnostikasi, M., 1976; Yuqumli kasalliklarning mikrobiologik diagnostikasi bo'yicha ko'rsatmalar, tahr. K. I. Matveeva, p. 172, M., 1973; Subbotina Yu. L. va boshqalar. Eritotsitlar va bakterial O-tashxis reaktsiyalarida salmonellyoz va antijenik birikmalarning serologik diagnostikasi, Jurn, mikr., Epid va immunitet, № 3, p. 19, 1970 yil, bibliogr.
L.B. Epifaniya.
Ro'yxatga olish to'g'risidagi guvohnoma № RZN 2016/3905, 04.04.2016 y
Uchrashuv
"RPHA uchun eritrositik salmonella Vi-antijeni diagnostikasi" (SED-Vi) reaktivlar to'plami passiv gemagglutinatsiya reaktsiyasi (RPHA) orqali inson qon zardobidagi tifo qo'zg'atuvchisi Vi-antijeniga antikorlarni aniqlash uchun mo'ljallangan.
Belgilarni o'rnating
Operatsion printsipi
Tif isitmasi qo'zg'atuvchisiga antijismlar mavjud bo'lganda, vi-antijinga sezgir tovuq eritrotsitlarining gemagglutinatsiyasi kuzatiladi, bu planshetning U shaklidagi quduqlari tubida joylashtirilgan eritrotsitlarning "soyaboni" paydo bo'lishiga olib keladi. Tif isitmasi qo'zg'atuvchisiga antikorlar bo'lmaganda, o'rnatilgan eritrotsitlar "nuqta" hosil qiladi.
Tarkibni o'rnating
Reaktiv nomi | Ta'rif | To'plamdagi miqdor |
---|---|---|
Salmonella eritrositlari diagnostikasi Vi-antijenik, quruq 6% (EDC) | Shakllangan tovuq eritrositlari S. typhi Vi-antijeni bilan sezgirlanadi. Quruq jigar rangdagi gigroskopik massa. Eritgandan so'ng, suspenziya qizil-jigarrang rangga ega. | 1 shisha, 0,6 ml |
Zardobli salmonellalar diagnostikasi, Vi retseptorlari, quruq (suyultirish 1:20, (K +)) | Quyon zardobidagi salmonellalar adsorblangan, Vi retseptorlari, suyultirish 1:20. Quruq gigroskopik oq gözenekli massa. Eritilganidan keyin bu aniq sarg'ish suyuqlik yoki rangsiz. | 1 shisha, 0,3 ml dan |
Namlik eritgich (RIP) | Tiniq ko'k-binafsha suyuqlik. | 1 shisha, 10 ml |
Fosfat tamponlangan sho'r (PBS) | Shaffof rangsiz suyuqlik. | 1 shisha, 10 ml |
Immunologik reaktsiyalar uchun bitta ishlatiladigan polimer plastinka | Shaffof rangsiz polistiroldan tayyorlangan immunologik reaktsiyalar uchun bir martali ishlatiladigan polimer plastinka. | 1 ta kompyuter. |
Diagnostik xususiyatlar
Diagnostikumni RPHA-da diagnostik salmonellalar adsorbsiyalangan sarum, Vi retseptorlari, quruq (zaryad 1:20), sarum yorlig'ida ko'rsatilgan titrga biriktirish kerak. Sog'lom odamlarning qon zardobini diagnostik xususiyatlarining shartli darajasi sarumning suyultirilishi 1:20 dan yuqori bo'lmasligi kerak. Tahlil vaqti 3040 minut. To'plam skrining versiyasida 42 ta qon seriyasini yoki titrlash versiyasida 10 ta qon zardobini o'rganish uchun mo'ljallangan.
Ehtiyot choralari
To'plam faqat in vitro diagnostikasi uchun mo'ljallangan. Kitga kiritilgan moddalar inaktiv va xavfsizdir. To'plam bilan ishlashda SP 1.3.2322-08 va SanPiN 2.1.7.2790-10 qoidalariga rioya qilish kerak.
Qo'shimcha uskunalar va materiallar
Uskunalar, materiallar, echimlar:
- o'zgaruvchan dozalash hajmi 5 - 40 mkl bo'lgan 1 kanalli pipetka dispenserlari; 40 - 200 mkl; 200 - 1000 mkl va 1000 - 5000 mkl;
- o'zgaruvchan dozalash hajmi 5 - 40 mkl va 40 - 200 mkl bo'lgan 8- yoki 12 kanalli dispenser dispenserlari;
- distillangan suv (GOST 6709-72).
Tahlil qilingan namunalar
Tekshirilgan qon zardobidagi namunalar 2 dan 8 ° C gacha bo'lgan haroratda qon olingan paytdan boshlab 3 kundan ko'p bo'lmagan muddatda saqlanadi. Zardobni muzlatilgan holatda, minus 18 ° C dan yuqori bo'lmagan haroratda 1 yildan ko'p bo'lmagan muddatga saqlashga ruxsat beriladi. Ishlatishdan oldin namunalar 16-25 ° C haroratda eriydi va chayqatish bilan aralashtiriladi. Qayta muzlatishga yo'l qo'yilmaydi. Bakterial o'sishi va gemolizi bo'lgan namunalarni ishlatmaslik kerak. Reaktsiyani boshlashdan oldin sinovdan o'tgan zardobni 56 ° C da 30 daqiqa davomida isitiladi.
Tahlil
Nazorat diagnostik zardobini tayyorlash (K +)
0,3 ml (K +) dan salmonellalarning adsorblangan sarumini, Vi retseptorlarini, quruq (suyultirish 1:20) ishchi eritmasini tayyorlang. Buning uchun K + bilan flakon tarkibiga 0,3 ml fosfat tamponlangan sho'r (PBS) qo'shiladi. Qolgan zardob miqdorini olish va muzlatish natijasida minus 18 ° C dan yuqori bo'lmagan haroratda 6 oy davomida saqlash mumkin.
Eritrosit salmonellalar (EDS) diagnostikasini tayyorlash
Eritrositik salmonellalar diagnostikasining suspenziyasini ishchi seyreltini tayyorlash uchun quruq 6% EDMSli flakon tarkibiga 0,6 ml distillangan suv qo'shiladi va 16-25 ° C haroratda 2 soat davomida namlanadi. Keyin eritmaga 2,4 ml fosfat tampon eritmasi (PBS) qo'shiladi. Ishchi eritma 2 dan 8 ° C gacha bo'lgan haroratda 1 oydan ko'p bo'lmagan muddatda saqlanadi. Muzlatishga yo'l qo'yilmaydi.
Qon zardobini skriningi uchun RPHA bosqichi
Tekshiruv uchun qon zardoblari plastinka quduqlarida quyidagicha suyultiriladi:
- 1:20 ning dastlabki eritmalari plastinkaning birinchi quduqlarida tayyorlanadi, avval 190 mkl RIP eritmasi, so'ngra 10 mkl o'rganilgan zardob qo'shiladi. Har bir sarum alohida uchi bilan qo'shiladi va ehtiyotkorlik bilan tomiziladi (zardob qo'shilgandan keyin quduqlardagi eritma rangi ko'k-binafsha rangdan yashil rangga o'zgarishi kerak);
- 1: 40 skrining eritmalari ikkinchi quduqlarda avval 25 mkl PBS eritmasi, so'ngra 25 mkl oldin suyultirilgan zardobni va pipetkani yaxshilab qo'shib tayyorlanadi.
RPHA-ning har bir o'rnatilishida K + titrini nazorat qilish aniqligini o'tkazish kerak. Buning uchun uzun qatorning 8 teshigiga 50 mkl PBS eritmasi qo'shiladi. Keyin birinchi quduqqa 50 mkl K + ishchi eritmasi (1:20) qo'shiladi, yaxshilab tomiziladi va keyingi quduqlarga o'tkaziladi, har biri 50 mk, 1:40 dan 1: 5120 gacha 2 barobar eritmalar olinadi. Boshqa 4 quduqda o'z-o'zidan gemaglutinatsiya yo'qligi uchun SEDni boshqarish uchun 50 mkl PBS eritmasi qo'shiladi.
Tekshirilgan zardobning skrining suyultirilishi bilan plastinkaning barcha quduqlariga (RIP tarkibiga ega bo'lganlar bundan mustasno) va boshqaruv elementlari 25 mkl EDM qo'shadi. Ishlatishdan oldin SED suspenziyasini flakonda yoki patnisda aralashtiring! Planshet yaxshilab silkitiladi va 16-25 ° C haroratda 30-40 minut davomida nazoratdagi eritrotsitlar to'liq o'rnatilgunga qadar qoldiriladi.
O'rganilgan qon zardobini titrlashda RGHni shakllantirish
O'rganilgan zardobni va ishchi eritmani Titrlash plastinkaning qisqa qatorlarida amalga oshiriladi. Boshqa qisqa satr ERIning o'z-o'zidan gemaglutinatsiyasining yo'qligini nazorat qilish uchun ishlatiladi.
Sinov zardobini titrlash uchun qisqa qatorlarning birinchi quduqlariga 180 mkl RIP eritmasi qo'shiladi. Qolgan barcha quduqlar 50 mkl PBS eritmasini qo'shadilar.
RIP eritmasi bilan quduqlarga, o'rganilgan zardobdan 20 mkl qo'shing (1:10 suyultirishni oling). Har bir sarum o'ziga xos uchi bilan qo'shiladi va ehtiyotkorlik bilan tomiziladi (quduqlardagi eritma rangi ko'k-binafsha rangdan yashil rangga o'zgarishi kerak). Keyin, birinchi quduqlardan, 50 mkl satrlarning keyingi quduqlariga o'tkazilib, 1:20 dan 1: 1280 gacha ikki marta seyreltilir. Titrlash oxirida 50 mkl hajmdagi eritmalar oxirgi quduqlardan chiqariladi.
RPHA-ning har bir o'rnatilishida K + titerini nazorat qilish aniqligini o'tkazish kerak. Buning uchun uzun qatorning 8 teshigiga 50 mkl PBS eritmasi qo'shiladi. Keyin, birinchi quduqqa 50 mkl K + ish eritmasi (1:20) qo'shiladi, yaxshilab tomiziladi va keyingi quduqlarga o'tkaziladi, har biri 50 mk, 1:40 dan 1: 5120 gacha 2 barobar eritmalar olinadi.
Spontan gemaglutinatsiya yo'qligi uchun tashxis qo'yish uchun qisqa qatorning barcha quduqlariga 50 mkl PBS eritmasi qo'shiladi.
Barcha quduqlarda (RIPni o'z ichiga olgan seriya uchun har bir qatorning birinchi quduqlaridan tashqari) 25 mkl EDM qo'shiladi. Ishlatishdan oldin SED suspenziyasini flakonda yoki patnisda aralashtiring! Planshet yaxshilab silkitiladi va 16-25 ° C haroratda 30-40 minut davomida nazoratdagi eritrotsitlar to'liq o'rnatilgunga qadar qoldiriladi.
Buxgalteriya hisobi va natijalarni talqin qilish
Qon zardobini tekshirganda natijalarni hisobga olish
Natijalar to'rtta xochning an'anaviy shkalasi bo'yicha qayd etiladi. Sarumning titrini uning suyultirilishi hisoblanadi, bu esa kamida 3 (+++) xoch orqali gemaglutinatsiyani ta'minlaydi.
- ++++ (4+) - aglutinlangan eritrotsitlar teshikning pastki qismida teskari "soyabon" hosil qiladi, uning qirralari tushadi;
- +++ (3+) - aglutinlangan eritrotsitlar teshikning pastki qismida teskari "soyabon" hosil qiladi, uning qirralari teng;
- ++ (2+) - quduq tubida aglutinlangan eritrotsitlar bilan bir qatorda, aglutinlanmagan eritrotsitlarning mayda "halqasi" shaklida cho'kindi hosil bo'ladi;
- + (1+) - eritrotsitlarning aksariyati aglutinlanmaydi va mayda "halqalar" shaklida joylashadi;
- (-) - aglutinlanmagan eritrotsitlar quduq tubida "nuqta" hosil qiladi.
Vi-antijeni bilan kamida 3 ta xoch (+++) bilan to'ldirilgan eritrotsitlarning gemagglutinatsiyasi ijobiy natija hisoblanadi.
Diagnostikaning sifat nazorati 4 ta nazorat qatoridagi quduq bo'lib, unga faqat PBS eritmasi va SED qo'shilgan. Ushbu quduqlarda o'z-o'zidan gemagglutinatsiya bo'lmasligi kerak - reaktsiya salbiy (-). Aks holda, ish takrorlanishi kerak. Agar takroriy tayinlash paytida gemaglutinatsiya paydo bo'lsa, u holda preparat ishlatilmaydi.
Salbiy natijaga ega sera Vi-antijeni antijismlarsiz, 1:40 va undan past bo'lgan diagnostik titrda ko'rib chiqilishi kerak.
1:40 ni suyultirishda ijobiy natija beradigan sera, uning titrini aniqlash uchun sarum titratsiyasi bilan variantda qayta tekshirilishi kerak.
Qon zardobini titrlashda natijalarni hisobga olish
Sarumning titri bu suyultirish bo'lib, gemaglutinatsiya kamida 3 (+++) xochni beradi.
Diagnostikaning sifat nazorati bu SED nazorati uchun ketadigan quduqdir. Ushbu quduqlarda o'z-o'zidan gemagglutinatsiya bo'lmasligi kerak - reaktsiya salbiy (-). Aks holda, ish takrorlanishi kerak. Agar takroriy tayinlash paytida gemaglutinatsiya paydo bo'lsa, u holda preparat ishlatilmaydi.