Diagnosticum eritrocitna salmonela vi antigena. Analitičke i dijagnostičke performanse
Cijena: na zahtjev
Proizvod možete dodati u košaricu navođenjem količine
Skup reagensa Diagnosticum Salmonella VI-antigenski namijenjen je otkrivanju specifičnih antitijela na Wi-antigen Salmonella typhus u serumu ljudske krvi u reakciji pasivne hemaglutinacije (RPHA).
POSTAVITE KARAKTERISTIKE
2.1. Princip metode.
Aktivni princip Diagnosticum Salmonella VI-antigena je Vi-antigen, fiksiran na površini eritrocita. Pri interakciji sa serumima koji sadrže antitela na B-antigen, primećuje se fenomen aglutinacije eritrocita.
2.2. SASTAV KITA
Reagensi | iznos |
Diagnosticum eritrocitna salmonela Vi-antigena tečnost - je 1% suspenzija eritrocita ovna formalinizirana i senzibilizirana Vi-antigenom Salmonella typhus u otopini fosfatnog pufera (pH 7,2 + 0,2; koncentracija 0,06 mol / l). Homogena smeđa suspenzija bez pahuljica; nakon taloženja nastaju 2 sloja: gusti smeđi talog eritrocita i prozirni žućkasti supernatant | 1 bočica - 3 ml |
Dijagnostička serumska salmonela adsorbirani Vi receptor suv -homogena masa od bijele sa smeđkastom bojom do bež boje | 1 bočica - od 0,1 ml |
1% suspenzija formaliniziranih, nesenzibiliziranih ovčjih eritrocita - homogena smeđa suspenzija bez pahuljica; nakon taloženja nastaju 2 sloja: gusti smeđi talog eritrocita i prozirni žućkasti supernatant | 1 boca - |
Rješenje za razrjeđivanje seruma i proizvodnju RPHA -0,9% otopina natrijum klorida je bistra bezbojna tečnost, pH 6,5 do 7,5 | 2 bočice - po 8 ml |
Jednokratna ploča s okruglim dnom za imunološke reakcije -sastoji se od 8 redova, od kojih svaki uključuje 12 rupa s prozirnim, bezbojnim, okruglim dnom | 1 PC |
ANALITIČKE I DIJAGNOSTIČKE KARAKTERISTIKE.
3.1. Diagnosticum treba aglutinirati u RPHA dijagnostičkim serumom Salmonela adsorbirani B i B receptor suv u razblaženju od najmanje 1: 160.
Uvjetni nivo dijagnostičkih karakteristika krvnog seruma zdravih ljudi treba smatrati razrjeđivanjem seruma ne većim od 1:20.
3.2. Vrijeme analize je 2 sata.
3.3. Set je dizajniran za 8 definicija.
MJERE PREDOSTROŽNOSTI
Pri radu s kompletom treba se pridržavati „Pravila za uređaj, sigurnosnih mjera zaštite, industrijske sanitarije, protuepidemijskog režima i lične higijene pri radu u laboratorijama (odjelima, odjelima) sanitarnih i epidemioloških institucija sistema Ministarstva zdravlja SSSR-a (M., 1981).
Analiziranim serumima, kao i reagensima u dodiru s njima, treba smatrati potencijalno zarazne, sposobne da dugo održavaju ili prenose HIV, virus hepatitisa ili bilo koji drugi uzročnik virusne infekcije - s njima treba postupati pažljivo:
- rad sa gumenim rukavicama;
- prilikom pipetiranja morate koristiti automatske pipete;
- po završetku rada, analizirani serumi i reagensi u kontaktu s njima, instrumente treba obraditi dezinficijensom
- opremu prije i poslije rada obrišite sa 70% etilnim alkoholom.
Analizirani serumi trebaju se inaktivirati na 56 ° C 30 minuta.
Dijagnostički serum Salmonella adsorbirani B i B receptor uključen u komplet je inaktiviran.
Objektivni rezultati ispitivanja zagarantovani su pod sledećim uslovima:
- čuvati sve reagense u kompletu na temperaturi od 2 do 8 0 S;
- ne koristite reagense kojima je istekao rok trajanja;
- nemojte koristiti reagense u kompletu ako njihova ambalaža nije odgovarajuće označena;
- za provođenje RPGA koristite reagense koji su uključeni samo u ovaj komplet.
Potvrda o registraciji br. RZN 2016/3905 od 04.04.2016
Imenovanje
Komplet reagenasa "Diagnosticum eritrocitna salmonela Vi-antigen za RPHA" (SED-Vi) namijenjen je otkrivanju antitijela na Vi-antigen uzročnika tifusa u serumu ljudske krvi pasivnom reakcijom hemaglutinacije (RPHA).
Postavite karakteristiku
Princip rada
U prisustvu antitela na uzročnika tifusne groznice, uočava se hemaglutinacija pilećih eritrocita senzibiliziranih na vi-antigen, što dovodi do stvaranja "kišobrana" taloženih eritrocita na dnu jažica tablete u obliku slova U. U nedostatku antitela na uzročnika tifusne groznice, ustaljeni eritrociti čine "tačku".
Postavite kompoziciju
Naziv reagensa | Opis | Količina u kompletu |
---|---|---|
Diagnosticum eritrocitna salmonela Vi-antigena, suha 6% (EDC) | Formalinizirani pileći eritrociti senzibilizirani sa S. typhi Vi-antigenom. Suva higroskopna masa smeđe boje. Nakon otapanja, suspenzija je crveno-smeđa. | 1 bočica, od 0,6 ml |
Dijagnostička adsorbirana salmonela u serumu, Vi receptor, suv (razrjeđenje 1:20, (K +)) | Adsorbirana salmonela zečjeg seruma, Vi receptor, razrjeđenje 1:20. Suva higroskopna bijela porozna masa. Nakon otapanja bistra je žućkasta tečnost ili bezbojna. | 1 bočica, od 0,3 ml |
Razrjeđivač uzorka (RIP) | Prozirna plavo-ljubičasta tečnost. | 1 bočica, 10 ml |
Fiziološka otopina u fosfatnom puferu (PBS) | Prozirna bezbojna tečnost. | 1 bočica, 10 ml |
Polimerna pločica za jednokratnu upotrebu za imunološke reakcije | Polimerna pločica za imunološke reakcije za jednokratnu upotrebu od prozirnog bezbojnog polistirena. | 1 PC. |
Dijagnostičke karakteristike
Diagnosticum treba aglutinirati u RPHA dijagnostičkim serumom adsorbiranim salmonelom, Vi receptor, suv (razrijeđen 1:20), prema titru naznačenom na naljepnici seruma. Uvjetni nivo dijagnostičkih karakteristika krvnog seruma zdravih ljudi treba smatrati razrjeđivanjem seruma ne većim od 1:20. Vrijeme analize je 3040 minuta. Komplet je dizajniran za proučavanje 42 krvna seruma u probirnoj verziji ili 10 krvnih seruma u titracijskoj verziji.
Mjere predostrožnosti
Komplet je samo za in vitro dijagnostičku upotrebu. Supstance uključene u komplet su inaktivirane i sigurne. Pri radu s kompletom treba se pridržavati SP 1.3.2322-08 i SanPiN 2.1.7.2790-10.
Dodatna oprema i materijali
Oprema, materijali, rješenja:
- 1-kanalni dozatori za pipete s promjenjivom zapreminom doziranja od 5 - 40 μl; 40 - 200 μl; 200 - 1000 μl i 1000 - 5000 μl;
- dozatori za pipete 8- ili 12-kanalni sa promenljivom zapreminom doziranja od 5 - 40 μl i 40 - 200 μl;
- destilirana voda (GOST 6709-72).
Analizirani uzorci
Istraženi uzorci krvnog seruma čuvaju se na temperaturi od 2 do 8 ° C ne više od 3 dana od trenutka uzimanja uzorka krvi. Dozvoljeno je čuvanje seruma u smrznutom stanju na temperaturi ne višoj od minus 18 ° C ne duže od 1 godine. Prije upotrebe uzorci se odmrzavaju na temperaturi od 16 do 25 ° C i miješaju se mućkanjem. Ponovno zamrzavanje nije dozvoljeno. Uzorci s bakterijskim rastom i hemolizom ne smiju se koristiti. Prije podešavanja reakcije, testirani serumi se zagrijavaju na 56 ° C tijekom 30 minuta.
Analiza
Priprema kontrolnog dijagnostičkog seruma (K +)
Pripremite radni rastvor dijagnostičkog adsorbiranog salmonele, Vi receptor, suv (razblaženje 1:20) od 0,3 ml (K +). Za to se u sadržaj bočice s K + doda 0,3 ml fiziološke otopine puferirane fosfatom (PBS). Preostala količina seruma može se alikvotirati i smrznuto čuvati na temperaturi koja ne prelazi minus 18 ° C ne duže od 6 mjeseci.
Priprema dijagnostike eritrocitne salmonele (EDS)
Da bi se pripremilo radno razrjeđenje suspenzije eritrocitne dijagnostike salmonele, u sadržaj bočice doda se 0,6 ml destilirane vode sa suvim 6% EDMS-om i ostavi za hidrataciju 2 sata na temperaturi od 16 do 25 ° C. Zatim se u otopinu doda 2,4 ml otopine fosfatnog pufera (PBS). Radni rastvor se čuva na temperaturi od 2 do 8 ° C najviše 1 mesec. Zamrzavanje nije dozvoljeno.
RPHA postavljanje za skrining seruma u krvi
Krvni serumi za skrining studije razblažuju se u jamicama ploče na sljedeći način:
- preliminarna razblaženja od 1:20 pripremaju se u prvim jažicama ploče, prvo se dodaje 190 μl RIP rastvora, a zatim 10 μl ispitivanih seruma. Svaki serum dodaje se zasebnim vrhom i pažljivo pipetira (boja otopine u jamicama nakon dodavanja seruma treba se promijeniti iz plavo-ljubičaste u zelenu);
- sirenja za prosijavanje od 1:40 pripremaju se u drugim jamicama tako što se prvo doda 25 μl otopine PBS, a zatim 25 μl prethodno razblaženih seruma i pažljivo pipetiranjem.
Pri svakom podešavanju RPHA, potrebno je izvršiti kontrolno određivanje K + titra. Da bi se to postiglo, dodaje se 50 μl PBS otopine u 8 rupa dugog reda. Zatim se u prvu jažicu doda 50 μl radne otopine K + (1:20), pažljivo pipetira i prebacuje u naredne jažice, po 50 μl, dobivajući dvostruko razblaživanje od 1:40 do 1: 5120. U još 4 jažice dodaje se 50 μl otopine PBS za kontrolu SED u odsustvu spontane hemaglutinacije.
U sve jažice ploče sa skrining razblaženjima ispitivanih seruma (osim onih prvih koji sadrže RIP) i kontrolama dodajte 25 μl EDM. Prije upotrebe promiješajte SED suspenziju u bočici ili ladici! Tableta se temeljito promućka i ostavi na temperaturi od 16 do 25 ° C 30 do 40 minuta dok se eritrociti u kontroli potpuno ne slegnu.
Formulacija RPHA tokom titracije ispitivanih seruma krvi
Titracija ispitivanih seruma i radnog rastvora K + vrši se u kratkim redovima ploče. Još jedan kratki red koristi se za kontrolu odsustva spontane hemaglutinacije EDS-a.
U prve jažice kratkih redova za titraciju test seruma dodaje se 180 μl RIP rastvora. U sve ostale jažice dodajte 50 μl PBS rastvora.
U jažice s RIP otopinom dodajte 20 μl ispitivanih seruma (dobiti razrjeđenje 1:10). Svaki se serum dodaje sa svojim vrhom i pažljivo pipetira (boja otopine u jamicama treba se promijeniti iz plavo-ljubičaste u zelenu). Zatim se iz prvih jažica 50 μl prenese u slijedeće jažice redova, dobivajući dvostruko razrjeđenje od 1:20 do 1: 1280. Na kraju titracije, otopine u zapremini od 50 μl uklanjaju se iz posljednjih jažica.
Pri svakom podešavanju RPHA, potrebno je izvršiti kontrolno određivanje K + titra. Da bi se to postiglo, dodaje se 50 μl PBS otopine u 8 rupa dugog reda. Zatim se u prvu jažicu doda 50 μl radne otopine K + (1:20), pažljivo pipetira i prebacuje u naredne jažice, po 50 μl, dobivajući dvostruko razblaživanje od 1:40 do 1: 5120.
Da bi se kontrolirao dijagnostikum zbog odsutnosti spontane hemaglutinacije, u sve jažice kratkog reda dodaje se 50 μl otopine PBS.
U sve jažice (osim u prve jažice svakog reda za proučavane serume koji sadrže RIP) dodajte 25 μl EDM. Prije upotrebe promiješajte SED suspenziju u bočici ili ladici! Tableta se temeljito promućka i ostavi na temperaturi od 16 do 25 ° C 30 do 40 minuta dok se eritrociti u kontroli potpuno ne slegnu.
Računovodstvo i tumačenje rezultata
Razmatranje rezultata pri pregledu krvnog seruma
Rezultati se bilježe prema konvencionalnoj skali od četiri ukrštanja. Titrom seruma smatra se njegovo razrjeđivanje, koje daje hemaglutinaciju sa najmanje 3 (+++) ukrštanja.
- ++++ (4+) - aglutinirani eritrociti čine obrnuti "kišobran" na dnu rupe, rubovi mu otpadaju;
- +++ (3+) - aglutinirani eritrociti čine obrnuti "kišobran" na dnu rupe, ivice su mu ujednačene;
- ++ (2+) - zajedno sa aglutiniranim eritrocitima na dnu bušotine nalazi se i sediment u obliku malog "prstena" neaglutiniranih eritrocita;
- + (1+) - većina eritrocita nije aglutinirana i taloži se u obliku malog „prstena“;
- (-) - neaglutinirani eritrociti čine "tačku" na dnu bušotine.
Pozitivnim rezultatom smatra se hemaglutinacija eritrocita napunjenih Vi-antigenom od najmanje 3 ukrštanja (+++).
Kontrola kvaliteta dijagnostike su 4 jažice kontrolnog reda u koje su dodani samo PBS rastvor i SED. U tim jažicama ne bi trebalo biti spontane hemaglutinacije - reakcija je negativna (-). U suprotnom, studiju treba ponoviti. Ako se hemaglutinacija pojavi tokom ponovljenog postavljanja, tada se lijek ne koristi.
Serumi s negativnim rezultatom trebaju se smatrati bez antitijela na Vi-antigen pri dijagnostičkom titru 1:40 i nižim.
Serume koji daju pozitivan rezultat u razrjeđenju 1:40 treba ponovno testirati u varijanti sa titracijom seruma kako bi se utvrdio njegov titar.
Razmatranje rezultata pri titriranju krvnog seruma
Titr seruma je njegovo razrjeđivanje, što daje hemaglutinaciji najmanje 3 (+++) ukrštanja.
Kontrola kvalitete dijagnostike su jažice reda za SED kontrolu. U tim jažicama ne bi trebalo biti spontane hemaglutinacije - reakcija je negativna (-). U suprotnom, studiju treba ponoviti. Ako se hemaglutinacija pojavi tokom ponovljenog postavljanja, tada se lijek ne koristi.
DIAGNOSTICUM (Grčki, diagnostikos sposoban za prepoznavanje) - suspenzije neutraliziranih mikroorganizama koje se koriste kao antigeni za serološke reakcije. Opasnost od rada sa živim kulturama, njihova varijabilnost i prisustvo širokih antigenih veza čine preporučljivom upotrebu D. - standardnijih i homogenijih preparata koji sadrže određene antigene komponente.
Uz pomoć D., u reakcijama aglutinacije, pasivne (indirektne) hemaglutinacije (RPHA) itd., U serumima ljudi i životinja otkrivaju se specifična antitijela u cilju dijagnoze i proučavanja imunološkog stanja tijela.
D. se posebno široko koristi u laboratorijskim studijama za crijevne infekcije. Međutim, općenitost antigene strukture crijevnih bakterija određuje prisustvo unakrsnih reakcija i zahtijeva diferencijalno otkrivanje antitijela. U tu svrhu vrši se selektivna supresija pojedinih antigena: uz pomoć fenola ili formalina, oni suzbijaju O-aglutinabilnost, kao što su predložili Felix i Olitsky (A. Felix, L. Olitzki, 1928). Uticajem alkoholom prema metodi Beča i Sontaga ili zagrijavanjem prema Kauffmannu, dobijaju se O-dijagnostičari sa inaktiviranim bičevičkim antigenom. Još je obećavajuća upotreba mono dijagnostika, čiji je princip stvaranja razvio F.G.Berngoff (1944). Ovi lijekovi sadrže samo jednu antigenu komponentu i u interakciji su samo sa određenim specifičnim antitijelima.
Prikazana je mogućnost očuvanja svojstava bakterijskih D. njihovom liofilizacijom (vidi).
D., koji se koriste za serodijagnozu različitih infekcija, u osnovi su slični, međutim, određene vrste ovih lijekova imaju određenu specifičnost.
Općenito je prihvaćeno da je RPHA osjetljiviji i specifičniji od bakterijske aglutinacije. Formalinizirani eritrociti osetljivi na antigene dobijene metodama Boivina i Westphala koriste se kao antigeni u RPHA.
Takođe je moguće koristiti eritrocit D. za otkrivanje antigena u tkivima, ispuštanje pacijenata, ekstrakte različitih supstanci itd. U tim slučajevima koristite eritrocite senzibilizirane antitijelima - "dijagnostika antitijela".
Virusni D. se uglavnom koristi u reakciji fiksacije komplementa (RSK), RTGA i reakciji neutralizacije. Pripremaju se od cijepljenih tekućina iz kulture, obrađenih (inaktiviranih) na razne načine.
Kratki opis glavnih D. i opseg njihove primjene predstavljeni su u tablici.
Postoje i eksperimentalni lijekovi koji se koriste u naučnom radu: eritrocitni kolidijagnostikum, eritrocit difterije D., hemaglutinirajući antigeni virusa zaušnjaka, hemaglutinirajući antigen ospica itd.
Tabela. Kratki opis glavnih dijagnostika i svrha njihove primjene
Diagnosticums |
kratak opis |
Svrha primjene (koristi se serum ispitanika) |
Bakterijska dijagnostika |
||
Diagnosticums bakterija iz porodice crijeva: Shigella Flexner, Sonne, Newcastle; salmonela tifus (OH, O), paratifusna groznica A i B, kolera suis, tiphimurium, entertidis |
Suspenzija mikroba (3 milijarde mikroorganizama u 1 ml), inaktivirana sa 0,4-0,5% rastvora formalina |
Izjava o reakciji aglutinacije radi pojašnjenja klina, dijagnoze bolesti |
O-dijagnostika salmonele (2, 4, 7, 8, 9 i 3, 10) |
Mikrobna suspenzija koja sadrži delimični O-antigen (3 milijarde mikroorganizama u 1 ml), dobijena od odabranih sojeva, inaktivirana sa 15% rastvorom glicerina |
Postavljanje reakcije aglutinacije za otkrivanje O-antitijela u salmonelozi |
Salmonela H-monodiagnosticums (a, b, c, d, eh, c, k, lv, gm, p, st i antigeni druge faze - 1, 2, 5, 6, 7) |
Mikrobna suspenzija koja sadrži komponente flagelarnog antigena 1. i 2. faze (3 milijarde mikroorganizama u 1 ml), dobijena od odabranih sojeva, inaktivirana sa 0,5% rastvora formalina |
Organiziranje reakcije aglutinacije radi otkrivanja H-antitijela u dijagnostičke svrhe i utvrđivanja istorije bolesti |
Vi-dijagnostika |
Mikrobna suspenzija (3 milijarde mikroorganizama u 1 ml) iz sojeva koji sadrže Vi-faktor, tretirani sa 0,4% rastvora formalina i 0,6% rastvora kalcijum hlorida |
Postavljanje reakcije aglutinacije radi identifikacije nosača tifusnih bakterija |
Brucellosis pojedinačni dijagnostik |
Suspenzija brucele u 12% otopini natrijum klorida, obojena u plavo i inaktivirana sa 0,5% rastvora fenola |
Organiziranje testa aglutinacije (Wrightov i Huddlesonov test za otkrivanje zaraženih ljudi i životinja - vidi Brucelosis, metode istraživanja) |
Tularemia diagnostik |
Mikrobna suspenzija (25 milijardi mikroorganizama u 1 ml) soja vakcine, inaktivirana sa 0,5% rastvora formalina |
Izjava reakcije volumetrijske kapi aglutinacije na staklu za serodijagnostiku i proučavanje imunološkog stanja cijepljenih |
Dijagnostika leptospiroze |
Liofilizirana mikrobna suspenzija 11 sojeva najčešćih serotipova |
Izjava RSK za potvrdu klina, dijagnozu bolesti |
Rickettsial dijagnostika |
Korpuskularni antigeni - suspenzija rikecije uzgajane u vrećicama žumanjaka pilećih embriona ili plućnom rikecijskom materijalu zaraženih glodavaca, tretirana etrom, celitom ili diferencijalnim centrifugiranjem |
Izjava o reakciji aglutinacije za diferencijalnu dijagnozu rikecioze |
Dijagnostika eritrocita |
||
Dijagnostika eritrocita od Shigella Flexner - Sonne |
Formalinizirani eritrociti senzibilizirani antigenima Boivin, Westphal, itd. |
Izjava RPGA radi pojašnjenja klinaste "dijagnoze dizenterije |
Salmonela eritrocita Vi-diagnostik |
Formalinizirani eritrociti senzibilizirani pročišćenim Vi-antigenom |
Izjava RPGA za otkrivanje tifusnog nosača bakterija |
O-dijagnostika salmonele eritrocita (1, 2, 12; 1, 4, 12; 6, 7; 6, 8; 1, 9, 12; 3, 10 i kompleks) |
1% suspenzija formaliniziranih eritrocita senzibiliziranih antigenima Boivin, Westphal, itd. |
Izjava RPHA za pojašnjenje klinaste "dijagnoze bolesti |
Liofilizirani dijagnostički eritrocit tularemije |
Formalinizirani liofilizirani eritrociti senzibilizirani antigenom tularemije |
Izjava RPHA za pojašnjenje klina, dijagnoze tularemije, kao i reakcije neutralizirajućih antitijela za otkrivanje: antigena |
Dijagnostika virusa |
||
Antigen virusa cjepiva |
Suvi preparat živog virusa vakcinije uzgajan na horion-alantoičnoj membrani pilećih embriona |
Izjava RPHA za otkrivanje antihemaglutinina kod pacijenata i vakcinisanih |
Adenovirus specifični antigen |
Pripremljeno uzgajanjem virusa tipa 6 u transplantabilnoj ćelijskoj kulturi A-1 (antigen zajednički svim adenovirusima) |
Postavljanje CSC-a za otkrivanje antitela koja vežu komplement u serumu pacijenata |
Dijagnostika krpeljnog encefalitisa i njemu etiološki sličnih bolesti |
Izjava RSK i RTGA radi pojašnjenja klina, dijagnoze bolesti |
|
Ornitoidni antigen |
Suvi pripravak od kuhanih vakcinisanih vrećica žumanceta pilećih embriona, ekstrahiran etrom, taložen acetonom i inaktiviran mertiolatom |
Formulacija RSK za dijagnozu ornitoze kod ljudi, ptica i životinja |
Dijagnostika gripa suva |
Alantoična tečnost embriona u razvoju piletine zaraženih jednim od sojeva virusa gripa tipa A, B ili C, inaktivirana formalinom, merthiolatom. Zbog varijabilnosti antigene strukture virusa gripe, pruža se česta promjena proizvodnih sojeva. |
Izjava RTGA radi pojašnjenja klina, dijagnoze bolesti |
Parainfluenza diagnostik tip 1, 2, 3 za RTGA, suvo |
Tekućina za kulturu (ljudski embrionalni bubreg) koja sadrži jedan od sojeva virusa parainfluence, tretirana tween-80, eterom i merthiolatom |
Izjava RTGA radi pojašnjenja klina, dijagnoze bolesti |
Bibliografija: Zuev A. S. Bakterijski vi-dijagnostik za identifikaciju hroničnih nosača tifusnih bakterija, Zhurn, micr., Epid i imun., Br. 2, str. 51, 1959, bibliogr. Zuev A.S., Novoselova A.I. i Likina I.V. Razvoj tehnike za proizvodnju O-dijagnostika i H-monodiagnostike i njihova upotreba u serodijagnostici salmoneloze, ibid., Br. 3, str. 42, 1956; Imunologija i prevencija crijevnih infekcija, ur. S.I.Didenko, str. 180, M., 1962; Karalnik BV Eritrocitna dijagnostika, M., 1976; Smjernice za mikrobiološku dijagnozu zaraznih bolesti, ur. K. I. Matveeva, str. 172, M., 1973; Subbotina Yu. L. i drugi. Serološka dijagnostika salmoneloze i antigenih veza u reakcijama sa eritrocitnim i bakterijskim O-dijagnostikama, Zhurn, mikro, Epid i imun., Br. 3, str. 19, 1970, bibliogr.
L.B. Epifanija.
Potvrda o registraciji br. RZN 2016/3905 od 04.04.2016
Imenovanje
Komplet reagenasa "Diagnosticum eritrocitna salmonela Vi-antigen za RPHA" (SED-Vi) namijenjen je otkrivanju antitijela na Vi-antigen uzročnika tifusa u serumu ljudske krvi pasivnom reakcijom hemaglutinacije (RPHA).
Postavite karakteristiku
Princip rada
U prisustvu antitela na uzročnika tifusne groznice, uočava se hemaglutinacija pilećih eritrocita senzibiliziranih na vi-antigen, što dovodi do stvaranja "kišobrana" taloženih eritrocita na dnu jažica tablete u obliku slova U. U nedostatku antitela na uzročnika tifusne groznice, ustaljeni eritrociti čine "tačku".
Postavite kompoziciju
Naziv reagensa | Opis | Količina u kompletu |
---|---|---|
Diagnosticum eritrocitna salmonela Vi-antigena, suha 6% (EDC) | Formalinizirani pileći eritrociti senzibilizirani sa S. typhi Vi-antigenom. Suva higroskopna masa smeđe boje. Nakon otapanja, suspenzija je crveno-smeđa. | 1 bočica, od 0,6 ml |
Dijagnostička adsorbirana salmonela u serumu, Vi receptor, suv (razrjeđenje 1:20, (K +)) | Adsorbirana salmonela zečjeg seruma, Vi receptor, razrjeđenje 1:20. Suva higroskopna bijela porozna masa. Nakon otapanja bistra je žućkasta tečnost ili bezbojna. | 1 bočica, od 0,3 ml |
Razrjeđivač uzorka (RIP) | Prozirna plavo-ljubičasta tečnost. | 1 bočica, 10 ml |
Fiziološka otopina u fosfatnom puferu (PBS) | Prozirna bezbojna tečnost. | 1 bočica, 10 ml |
Polimerna pločica za jednokratnu upotrebu za imunološke reakcije | Polimerna pločica za imunološke reakcije za jednokratnu upotrebu od prozirnog bezbojnog polistirena. | 1 PC. |
Dijagnostičke karakteristike
Diagnosticum treba aglutinirati u RPHA dijagnostičkim serumom adsorbiranim salmonelom, Vi receptor, suv (razrijeđen 1:20), prema titru naznačenom na naljepnici seruma. Uvjetni nivo dijagnostičkih karakteristika krvnog seruma zdravih ljudi treba smatrati razrjeđivanjem seruma ne većim od 1:20. Vrijeme analize je 3040 minuta. Komplet je dizajniran za proučavanje 42 krvna seruma u probirnoj verziji ili 10 krvnih seruma u titracijskoj verziji.
Mjere predostrožnosti
Komplet je samo za in vitro dijagnostičku upotrebu. Supstance uključene u komplet su inaktivirane i sigurne. Pri radu s kompletom treba se pridržavati SP 1.3.2322-08 i SanPiN 2.1.7.2790-10.
Dodatna oprema i materijali
Oprema, materijali, rješenja:
- 1-kanalni dozatori za pipete s promjenjivom zapreminom doziranja od 5 - 40 μl; 40 - 200 μl; 200 - 1000 μl i 1000 - 5000 μl;
- dozatori za pipete 8- ili 12-kanalni sa promenljivom zapreminom doziranja od 5 - 40 μl i 40 - 200 μl;
- destilirana voda (GOST 6709-72).
Analizirani uzorci
Istraženi uzorci krvnog seruma čuvaju se na temperaturi od 2 do 8 ° C ne više od 3 dana od trenutka uzimanja uzorka krvi. Dozvoljeno je čuvanje seruma u smrznutom stanju na temperaturi ne višoj od minus 18 ° C ne duže od 1 godine. Prije upotrebe uzorci se odmrzavaju na temperaturi od 16 do 25 ° C i miješaju se mućkanjem. Ponovno zamrzavanje nije dozvoljeno. Uzorci s bakterijskim rastom i hemolizom ne smiju se koristiti. Prije podešavanja reakcije, testirani serumi se zagrijavaju na 56 ° C tijekom 30 minuta.
Analiza
Priprema kontrolnog dijagnostičkog seruma (K +)
Pripremite radni rastvor dijagnostičkog adsorbiranog salmonele, Vi receptor, suv (razblaženje 1:20) od 0,3 ml (K +). Za to se u sadržaj bočice s K + doda 0,3 ml fiziološke otopine puferirane fosfatom (PBS). Preostala količina seruma može se alikvotirati i smrznuto čuvati na temperaturi koja ne prelazi minus 18 ° C ne duže od 6 mjeseci.
Priprema dijagnostike eritrocitne salmonele (EDS)
Da bi se pripremilo radno razrjeđenje suspenzije eritrocitne dijagnostike salmonele, u sadržaj bočice doda se 0,6 ml destilirane vode sa suvim 6% EDMS-om i ostavi za hidrataciju 2 sata na temperaturi od 16 do 25 ° C. Zatim se u otopinu doda 2,4 ml otopine fosfatnog pufera (PBS). Radni rastvor se čuva na temperaturi od 2 do 8 ° C najviše 1 mesec. Zamrzavanje nije dozvoljeno.
RPHA postavljanje za skrining seruma u krvi
Krvni serumi za skrining studije razblažuju se u jamicama ploče na sljedeći način:
- preliminarna razblaženja od 1:20 pripremaju se u prvim jažicama ploče, prvo se dodaje 190 μl RIP rastvora, a zatim 10 μl ispitivanih seruma. Svaki serum dodaje se zasebnim vrhom i pažljivo pipetira (boja otopine u jamicama nakon dodavanja seruma treba se promijeniti iz plavo-ljubičaste u zelenu);
- sirenja za prosijavanje od 1:40 pripremaju se u drugim jamicama tako što se prvo doda 25 μl otopine PBS, a zatim 25 μl prethodno razblaženih seruma i pažljivo pipetiranjem.
Pri svakom podešavanju RPHA, potrebno je izvršiti kontrolno određivanje K + titra. Da bi se to postiglo, dodaje se 50 μl PBS otopine u 8 rupa dugog reda. Zatim se u prvu jažicu doda 50 μl radne otopine K + (1:20), pažljivo pipetira i prebacuje u naredne jažice, po 50 μl, dobivajući dvostruko razblaživanje od 1:40 do 1: 5120. U još 4 jažice dodaje se 50 μl otopine PBS za kontrolu SED u odsustvu spontane hemaglutinacije.
U sve jažice ploče sa skrining razblaženjima ispitivanih seruma (osim onih prvih koji sadrže RIP) i kontrolama dodajte 25 μl EDM. Prije upotrebe promiješajte SED suspenziju u bočici ili ladici! Tableta se temeljito promućka i ostavi na temperaturi od 16 do 25 ° C 30 do 40 minuta dok se eritrociti u kontroli potpuno ne slegnu.
Formulacija RPHA tokom titracije ispitivanih seruma krvi
Titracija ispitivanih seruma i radnog rastvora K + vrši se u kratkim redovima ploče. Još jedan kratki red koristi se za kontrolu odsustva spontane hemaglutinacije EDS-a.
U prve jažice kratkih redova za titraciju test seruma dodaje se 180 μl RIP rastvora. U sve ostale jažice dodajte 50 μl PBS rastvora.
U jažice s RIP otopinom dodajte 20 μl ispitivanih seruma (dobiti razrjeđenje 1:10). Svaki se serum dodaje sa svojim vrhom i pažljivo pipetira (boja otopine u jamicama treba se promijeniti iz plavo-ljubičaste u zelenu). Zatim se iz prvih jažica 50 μl prenese u slijedeće jažice redova, dobivajući dvostruko razrjeđenje od 1:20 do 1: 1280. Na kraju titracije, otopine u zapremini od 50 μl uklanjaju se iz posljednjih jažica.
Pri svakom podešavanju RPHA, potrebno je izvršiti kontrolno određivanje K + titra. Da bi se to postiglo, dodaje se 50 μl PBS otopine u 8 rupa dugog reda. Zatim se u prvu jažicu doda 50 μl radne otopine K + (1:20), pažljivo pipetira i prebacuje u naredne jažice, po 50 μl, dobivajući dvostruko razblaživanje od 1:40 do 1: 5120.
Da bi se kontrolirao dijagnostikum zbog odsutnosti spontane hemaglutinacije, u sve jažice kratkog reda dodaje se 50 μl otopine PBS.
U sve jažice (osim u prve jažice svakog reda za proučavane serume koji sadrže RIP) dodajte 25 μl EDM. Prije upotrebe promiješajte SED suspenziju u bočici ili ladici! Tableta se temeljito promućka i ostavi na temperaturi od 16 do 25 ° C 30 do 40 minuta dok se eritrociti u kontroli potpuno ne slegnu.
Računovodstvo i tumačenje rezultata
Razmatranje rezultata pri pregledu krvnog seruma
Rezultati se bilježe prema konvencionalnoj skali od četiri ukrštanja. Titrom seruma smatra se njegovo razrjeđivanje, koje daje hemaglutinaciju sa najmanje 3 (+++) ukrštanja.
- ++++ (4+) - aglutinirani eritrociti čine obrnuti "kišobran" na dnu rupe, rubovi mu otpadaju;
- +++ (3+) - aglutinirani eritrociti čine obrnuti "kišobran" na dnu rupe, ivice su mu ujednačene;
- ++ (2+) - zajedno sa aglutiniranim eritrocitima na dnu bušotine nalazi se i sediment u obliku malog "prstena" neaglutiniranih eritrocita;
- + (1+) - većina eritrocita nije aglutinirana i taloži se u obliku malog „prstena“;
- (-) - neaglutinirani eritrociti čine "tačku" na dnu bušotine.
Pozitivnim rezultatom smatra se hemaglutinacija eritrocita napunjenih Vi-antigenom od najmanje 3 ukrštanja (+++).
Kontrola kvaliteta dijagnostike su 4 jažice kontrolnog reda u koje su dodani samo PBS rastvor i SED. U tim jažicama ne bi trebalo biti spontane hemaglutinacije - reakcija je negativna (-). U suprotnom, studiju treba ponoviti. Ako se hemaglutinacija pojavi tokom ponovljenog postavljanja, tada se lijek ne koristi.
Serumi s negativnim rezultatom trebaju se smatrati bez antitijela na Vi-antigen pri dijagnostičkom titru 1:40 i nižim.
Serume koji daju pozitivan rezultat u razrjeđenju 1:40 treba ponovno testirati u varijanti sa titracijom seruma kako bi se utvrdio njegov titar.
Razmatranje rezultata pri titriranju krvnog seruma
Titr seruma je njegovo razrjeđivanje, što daje hemaglutinaciji najmanje 3 (+++) ukrštanja.
Kontrola kvalitete dijagnostike su jažice reda za SED kontrolu. U tim jažicama ne bi trebalo biti spontane hemaglutinacije - reakcija je negativna (-). U suprotnom, studiju treba ponoviti. Ako se hemaglutinacija pojavi tokom ponovljenog postavljanja, tada se lijek ne koristi.